單胺氧化酶（MAO）活性檢測試劑盒（微量法）

單胺氧化酶（MAO）活性檢測試劑盒（微量法）

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品貨號：BA1078

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡介：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動(dòng)物、 豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO 活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂，從而引發(fā)多種病癥。

MAO 催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛，進(jìn)一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰，測定360nm光吸收下降的速率，計(jì)算MAO活性。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液一：液體100ml×1瓶，4℃保存。

提取液二：液體100ml×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體60ml×2瓶，4℃保存。

試劑二：液體2ml×1管，4℃避光保存。

需自備的儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔UV板、蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液一）進(jìn)行冰浴勻漿，10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 mL 預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）。取上清置于冰上待測。

2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000:1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加1mL提取液一），冰浴超聲破碎細(xì)胞（功率300W，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）。取上清置于冰上待測。

3、血清：直接測定。

二、測定操作表

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至360nm。

2、操作表

注意：空白管只需測定一次。

三、MAO活性的計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下：

1、按蛋白含量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ mg prot）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 114×△A÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ g）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 114×△A÷W

3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每10⁴個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ 10⁴ cell）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 114×△A÷細(xì)胞數(shù)量

4、按照液體體積計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ L）=△A÷?÷d ×V反總÷V樣= 114000×△A

ε：底物摩爾消光系數(shù)，1460L/ mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，60min，W：樣本質(zhì)量，g。

b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下：

1、按蛋白含量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ mg prot）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 228×△A÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ g）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 228×△A÷W

3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每10⁴個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ 10⁴ cell）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 228×△A÷細(xì)胞數(shù)量

4、按照液體體積計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ L）=△A÷?÷d ×V反總÷V樣= 228000×△A

ε：底物摩爾消光系數(shù)，1460L/ mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，60min，W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

2. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。