淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基（染色體病） 返回列表頁

淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基（染色體?。?/span>

產(chǎn)品名稱：

通用名稱：淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基（染色體?。?span style="color:#000000">

英文名稱：Lymphocyte Medium

包裝規(guī)格：4ml/瓶，56 瓶/盒

預(yù)期用途：

淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基為細(xì)胞標(biāo)本前處理試劑，用于淋巴細(xì)胞增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)后的淋巴細(xì)胞用于體外診斷，該產(chǎn)品不用于 治療性用途。 主要組成成分： RPMI1640、小牛血清、肝素、PHA 等。

使用方法：

1. 采血與接種

  采取外周血 1-2ml，在無菌條件下立即種血 0.3ml（7 號(hào)針頭約 20 滴）至淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，充分搖勻。

2. 培養(yǎng)

  將培養(yǎng)瓶放入 37℃恒溫箱中培養(yǎng) 68-72 小時(shí)，培養(yǎng)期間注意觀察培養(yǎng)基有無凝血、溶血或長菌的現(xiàn)象 （可培養(yǎng) 24 小時(shí)后將培養(yǎng)基輕搖一次，以便細(xì)胞可以獲得充分的營養(yǎng)）。

3. 制片

3.1 秋水仙素處理：

  在終止培養(yǎng)前，加入濃度為 20μg/ml 的秋水仙素 1-3 滴（7#針頭豎滴）后，繼續(xù)培養(yǎng) 2-3 小時(shí)；

3.2 收細(xì)胞：

  將培養(yǎng)完成的培養(yǎng)基倒入對(duì)應(yīng)的離心管內(nèi)，以 1500rpm 離心 7-10 分鐘，棄去上清液；

3.3 低滲：

  向離心管內(nèi)加入 37℃預(yù)溫的低滲液（0.075mol/L 氯化/鉀溶液）8ml，用吸管反復(fù)吹勻 10 次，置 37℃水浴箱 中水浴 25-35 分鐘；

3.4 預(yù)固定：

  向低滲的細(xì)胞懸液內(nèi)緩慢加入新配制的固定液（甲醇和乙酸按 3:1 的比例混合）1-1.5ml，輕輕混勻后置室溫 靜置 20 分鐘后，1500rpm 離心 7-10 分鐘，棄去上清液；

3.5 固定：

  沿管壁緩慢加入現(xiàn)配的預(yù)溫至 37℃的新配固定液約 8ml 輕輕混勻，然后 2000rpm 離心 10 分鐘。加入固定液 再次固定，棄上清，重復(fù)固定 1-2 次。用固定液將沉淀調(diào)成細(xì)胞懸液（不宜太濃，一般加固定液至 0.5ml）在冰 片上滴片，每張片上滴 2 滴。

3.6 烤片：

  立即放入 75℃烤箱中烤片 3 小時(shí)。

4. 顯帶

  先將玻片放在預(yù)溫至 37℃的 0.25%胰酶溶液中（pH=7.2-7.4）消化 1 分左右，每次作用時(shí)間并不*相同。 可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時(shí)間，再放在預(yù)溫至 37℃的 0.85% NACl 溶液中漂洗兩次，在預(yù) 溫至 37℃的吉姆薩染液中染色 10 分鐘，自來水沖洗干凈，用吹風(fēng)機(jī)吹干，即可閱片。

注意事項(xiàng)：

1. 采集的外周血若立即接種則無需加肝素抗凝，如需保存標(biāo)本，應(yīng)加肝素抗凝；

2. 采集的外周血在冰箱 4℃保存，保存期不亦超過一周。

儲(chǔ)存條件及有效期：

  4-8℃保存，有效期 1 個(gè)月，-5℃以下保存，有效期 12 個(gè)月，可穩(wěn)定至保質(zhì)期末。