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葡萄糖含量檢測試劑盒（可見分光光度法）

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產(chǎn)品貨號：BA1246

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品簡介：

葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動物而言，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的一能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505nm有特征吸收峰。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體25mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存；

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

操作步驟：

一、葡萄糖提取：

1、組織的處理：稱取約0.1g樣本，加入1mL蒸餾水研磨成勻漿，置沸水浴中煮沸10分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，常溫離心10min，取上清液備用。

2、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL蒸餾水），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復30次），置沸水浴中煮沸10分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液備用。

二、測定步驟：

1、 分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 在1.5mL離心管中依次加入下列試劑：

混勻，置37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴中，保溫15min，于505nm波長處讀取吸光度。

三、葡萄糖含量計算：

1、按蛋白濃度計算

葡萄糖含量（µmol/mg prot）＝C ×(A測定管－A空白管)÷（A標準管－A空白管)×V樣÷（Cpr×V樣）

＝0.5×(A測定管－A空白管)÷（A標準管－A空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

葡萄糖含量（µmol/g 鮮重）＝C ×(A測定管－A空白管)÷（A標準管－A空白管) ×V樣÷（W÷V樣總×V樣）

＝0.5 ×(A測定管－A空白管)÷（A標準管－A空白管) ÷W

3、按細菌或細胞數(shù)量計算

葡萄糖含量（µmol/10⁴ cell）＝C ×(A測定管－A空白管)÷（A標準管－A空白管) ×V樣÷（500÷V樣總×V樣）

＝0.001 ×(A測定管－A空白管)÷（A標準管－A空白管)

C：葡萄糖溶液濃度，0.5µmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣：加入的樣本體積，100µL=0.1mL；V樣總：樣本總體積，1mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞數(shù)量，500萬。

4、若A測定管大于1.5，稀釋后進行實驗。