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糜蛋白酶活性檢測試劑盒（紫外分光光度法）

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品貨號：BA1212

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品說明：

糜蛋白酶，又稱胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一種蛋白水解酶，能迅速分解變性蛋白質(zhì)。糜蛋白酶的功能與胰蛋白酶相似，但是具有分解能力強、毒性低和不良反應(yīng)小等優(yōu)點。臨床上糜蛋白酶用于痰液稀化，對膿性和非膿性痰液均有效；也用于創(chuàng)傷或手術(shù)后傷口愈合，如白內(nèi)障摘除。

糜蛋白酶催化 BTEE 水解，產(chǎn)物在256nm有特征光吸收；通過測定256nm光吸收增加速率，來計算糜蛋白酶活性。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前溶于4mL甲醇中，再用水定容至25mL?？煞盅b后-20保存，避免反復(fù)凍融。

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、 1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取

（1）組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）1：5-10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一

進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清即粗酶液。

（2）血清（漿）：直接檢測。

二、測定操作：

1.  紫外分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到256nm，蒸餾水調(diào)零。

2.  試劑一置于25℃水浴中保溫30min。

3.  操作表：

將上述試劑分別加入1mL石英比色皿后充分混勻，于256nm處測定初始吸光值A1，然后迅速將比色皿連同反應(yīng)液放入25℃水浴鍋中水浴3min，然后迅速拿出擦干測定3min的吸光A2，計算△A=A2-A1。

三、糜蛋白酶活性計算公式：

(1) 按蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃每毫克蛋白每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。

糜蛋白酶活(U/mg prot)= (△A×V反總÷ε÷d)÷(Cpr×V樣)÷T=3.8×△A÷Cpr。

(2) 按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃每克樣品每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。

糜蛋白酶活(U/g 鮮重)=(△A×V反總÷ε÷d)÷(W×V樣÷V提取)÷T=3.8×△A÷W。

(3) 按血清（漿）體積計算

活性單位定義：25℃每毫升血清（漿）每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。

糜蛋白酶活(U/mL )=(△A×V反總÷ε÷d)÷V樣÷T=3.8×△A。

V樣：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積，0.02mL；Cpr：粗酶液蛋白濃度，mg/mL，需要另外測定；W：樣本鮮重，g；V反總：反應(yīng)總體積，0.22 mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；T：反應(yīng)時間，3 min；ε：BTEE消光系數(shù)：0.964 mL/μmol/cm；d：比色皿光徑，1cm。

注意事項：

1. 當(dāng)△A大于0.2或者吸光值大于1時，建議將樣品稀釋后測定。

2. 當(dāng)△A小于0.03時，建議將樣品濃縮或者增加樣品體積進行測定，注意計算公式除以濃縮倍數(shù)或者改變體積。