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磷脂酶A2（PLA2）檢測試劑盒（分光光度法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1797

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣

產(chǎn)品簡介：

磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂酰基水解酶，廣泛存在于動(dòng)植物組織、細(xì)菌、細(xì)胞核分泌物中，參與脂肪消化，成熟、細(xì)胞信號(hào)傳遞、脂質(zhì)過氧化修復(fù)、宿主反應(yīng)等生理 過程，在控制體內(nèi)磷脂類物質(zhì)平衡、調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝、參與疾病的病理進(jìn)程等方面發(fā)揮著 及其重要的作用。

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿（HEPC）產(chǎn)生游離巰基，與DTNB反應(yīng)生成 黃色物質(zhì)，在412nm 處有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前根據(jù)用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

需自備的儀器和用品：

天平、超速冷凍離心機(jī)、研缽、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿。

操作步驟：

一、樣本處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min， 棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。

3. 血清：直接測定。

二、測定操作

三、計(jì)算公式

1. 按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △ A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

=73.53×△ A÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/g鮮重）= △ A÷（ε×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 73.53×△ A÷W

3. 細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/10⁴ cell）= △ A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T

= 73.53×△ A÷細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/mL）= △ A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T

= 73.53×△ A

ε：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10min。