如何改進(jìn)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的錯(cuò)誤

　ELISA試劑盒有許多實(shí)驗(yàn)操作步驟，新手操作難免出錯(cuò)。其中許多錯(cuò)誤是由不充分的細(xì)節(jié)造成的。有很多方法可以減少這種錯(cuò)誤，比如在做實(shí)驗(yàn)時(shí)少說話，以防止唾液掉進(jìn)酶的標(biāo)簽中。當(dāng)然，我們也要學(xué)會(huì)探索自己的問題，找出原因。那么，我們?nèi)绾胃倪M(jìn)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的錯(cuò)誤呢?

　　1、評(píng)價(jià)試劑的實(shí)用性

　　試劑的穩(wěn)定性對(duì)準(zhǔn)確度非常重要。在啟用ELISA試劑盒之前，應(yīng)重復(fù)檢測陰性和陽性對(duì)照品和樣品，試劑僅在試劑符合要求后才能使用。

　　2、操作前仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書

　　嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作。不同批號(hào)的試劑不混合。值得改進(jìn)的是，只有經(jīng)過反復(fù)的試驗(yàn)，如洗盤的數(shù)量，才能加以改進(jìn)。

　　3、加樣要準(zhǔn)確、快速

　　樣品添加的不準(zhǔn)確度和酶制劑用量的不確定度直接影響顯色效果。此外，顯色深度和A值的確定與顯色劑和最終液體的加入量有關(guān)，因此樣品的裝載應(yīng)謹(jǐn)慎。需要在一定時(shí)間內(nèi)完成采樣的實(shí)驗(yàn)，如果采樣速度慢，會(huì)出現(xiàn)誤差，試劑會(huì)暴露很長時(shí)間，特別是當(dāng)室溫過高時(shí)，保質(zhì)期會(huì)縮短甚至失效。

　　4、檢驗(yàn)技術(shù)人員應(yīng)具備實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。

　　檢測技術(shù)人員能夠熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器儀表，具有一定的總結(jié)和分析問題的能力，能及時(shí)、妥善地解決ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況。

　　5、洗滌要絕對(duì)干凈

　　洗版不干凈，酶偶聯(lián)物的背景顏色為假陽性。此外，清潔劑應(yīng)該是新鮮的，可以隨時(shí)使用。舊的洗滌劑會(huì)增加背景，也可能出現(xiàn)假陽性。

　　6、嚴(yán)控ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間

　　ELISA試劑盒反應(yīng)時(shí)間過長，酶被滅活，反應(yīng)時(shí)間過短，酶與血清中的微生物抗原和抗體不能全部結(jié)合，產(chǎn)物結(jié)構(gòu)松散不穩(wěn)定，易清洗，易產(chǎn)生假陰性。