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DB3.1 大腸桿菌克隆感受態(tài)細胞

產品信息：

組成 BC111-01
DB3.1 Competent cells 20×100µl

pUC19（0.1ng/µl） 5µl

儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。

產品介紹：

本公司生產的大腸桿菌DB3.1細胞含有gyrA462基因，對λ噬菌體的ccdB基因產物的毒性具有抵抗作用，特

別適用于轉化和擴增包含ccdB基因的質粒載體。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達107 cfu/µg，-70℃保存幾

個月轉化效率不發(fā)生改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質量穩(wěn)定，使用方便，質優(yōu)價

廉。

基因型：

F-gyrA462endA1Δ(sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)supE44ara-14galK2lacY1proA2rpsL20(SmR )xyl-5λ-leumtl1

抗生素耐藥性：細胞具有抗性。

操作步驟（以下操作均按無菌條件的標準進行）：

提示

感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。

進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到。

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。

（一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用 DNA體積

不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。)以下實驗以 100μl 感受態(tài)細胞為例。

2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。

3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻 2 分鐘，該過程不

要搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放

置

5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）

4. 向每個離心管中加入500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ ,150rpm，搖

床振蕩培養(yǎng) 60 分鐘，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將

細胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。（涂布用量可根據具

體實驗來調整。轉化質粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產物的轉

化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

相關試劑及培養(yǎng)基的制備方法：

1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于1L 燒杯中。加入約 800ml 的去

離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調節(jié) pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝

后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。

2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的

去離子水，溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調 pH 至 7.0。加

入去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入5ml 滅菌的 2M MgCl2溶液（此種培

養(yǎng)基稱為 SOB）。再補加經 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）。

3. 轉化復蘇細菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基，無菌狀態(tài)按 1ml

每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支?？梢詷O大地避

免培養(yǎng)基污染和減少勞動量。

4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。冷

卻至 50℃左右時加入相應濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細菌用的無菌

培養(yǎng)皿中，等瓊脂凝固后即可使用。

5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于40ml 滅菌水，濃度為200mmol/L。用無菌0.22μm過

濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。

6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。

E 、感受態(tài)細胞
E-1 、大腸桿菌克隆感受態(tài)細胞
貨號	產品名稱	規(guī)格	單位
BC101-01	0 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC101-02	0 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC102-01	DH5α 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC102-02	DH5α 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC103-01	JM109 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC103-02	JM109 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC104-01	XL1-Blue 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC104-02	XL1-Blue 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC105-01	Mach 1-T1 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC105-02	Mach 1-T1 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC117-01	Turbo 感受態(tài)細胞	100ul ×10	包
BC117-02	Turbo 感受態(tài)細胞	100ul ×20	包
BC118-01	Stable 感受態(tài)細胞	100ul ×20	包
BC106-01	DH10B 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC106-02	DH10B 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC107-01	OmniMAX2-T1 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC107-02	OmniMAX2-T1 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC108-01	Stbl3 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC115-01	Stbl4 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC109-01	XL10-Gold 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC110-01	JM110 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC111-01	DB3. 1 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC112-01	DH10BAC 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC113-01	NEB 10-beta 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC114-01	BJ5183-AD- 1 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
E-2 、大腸桿菌表達感受態(tài)細胞
貨號	產品名稱	規(guī)格	單位
BC201-01	BL21(DE3) 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC201-02	BL21(DE3) 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC202-01	BL21(DE3) pLysS 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC202-02	BL21(DE3) pLysS 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC203-01	M15 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC203-02	M15 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC204-01	Rosetta(DE3) 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC204-02	Rosetta(DE3) 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC205-01	OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC205-02	OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細胞	100ul ×20	包
BC206-01	T7 表達感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC206-02	T7 表達感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC207-01	T7pLysY 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC207-02	T7pLysY 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC208-01	Shuffle T7-K12 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC208-02	Shuffle T7-K12 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
BC209-01	Shuffle T7-B 感受態(tài)細胞	100μl ×10	包
BC209-02	Shuffle T7-B 感受態(tài)細胞	100μl ×20	包
E-3 大腸桿菌電轉感受態(tài)細胞
貨號	產品名稱	規(guī)格	單位
BC401-01	NEB 10-beta 電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包
BC402-01	BJ5183 電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包
BC403-01	BJ5183-AD- 1 電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包
BC404-01	0 電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包
BC405-01	DH5α 電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包
E-4 農桿菌感受態(tài)細胞
貨號	產品名稱	規(guī)格	單位
BC301-01	LBA4404 農桿菌感受態(tài)細胞	100ul ×20	包
BC302-01	AGL1 農桿菌感受態(tài)細胞	100ul ×20	包
BC303-01	EHA105 農桿菌感受態(tài)細胞	100ul ×20	包
BC304-01	GV3101 農桿菌感受態(tài)細胞	100ul ×20	包
E-5 、農桿菌電轉感受態(tài)細胞
貨號	產品名稱	規(guī)格	單位
BC305-01	LBA4404 農桿菌電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包
BC306-01	AGL1 農桿菌電轉感受電轉態(tài)細胞	50μl ×20	包
BC307-01	EHA105 農桿菌電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包
BC308-01	GV3101 農桿菌電轉感受態(tài)細胞	50μl ×20	包

南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內外市場專業(yè)研發(fā)、生產和銷售細胞、外泌體、ELISA 試劑盒、抗體、重組蛋白及相關試劑。產品在免疫學、信號轉導、代謝、神經科學等領域內都有科學文獻發(fā)表，被國內外多所大學、研究機構和藥學平臺使用并發(fā)表文獻多達1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產品和完善的服務體系現已受到廣大國內外用戶的青睞和認可。
品牌優(yōu)勢
1、產品優(yōu)勢：產品具有高特異性、回收率高、線性好、變異系數低、穩(wěn)定性好；
2、質量保證：產品質量穩(wěn)定，每批次產品必須通過 QA、QC 檢測才可出庫；
3、實力強大： 標準實驗室、研發(fā)中心，動物房；
4、技術支持：技術部 5*8 小時技術問題及時解答；
5、服務周到：發(fā)貨及時，三個工作日順豐快遞；售后無憂，包退包換。
6、研發(fā)、生產科研產品：ELISA 試劑盒：人、大小鼠、牛、兔、山羊、倉鼠、豬、馬、雞、犬、豚鼠、猴、綿羊等多種屬1000多種指標；
抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達系統(tǒng)穩(wěn)定表達蛋白 1000 余種。