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ArcticExpress(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC218-01
ArcticExpress(DE3) 20×100?l
pUC19 質粒 5?l
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。
產(chǎn)品說明：
ArcticExpress(DE3)細胞來源于 BL21-Gold 菌株，屬于 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型的大腸桿菌 B 菌株。菌株含有抗性
的質粒能穩(wěn)定表達海洋細菌 Oleispira antarctica 的兩個低溫分子伴侶 Cpn10 和 Cpn60。這些伴侶蛋白在較低溫度（4-12℃）下，比
大腸桿菌 GroEL/GroES 表現(xiàn)出更高的活性, 在低溫下可以更好地促進重組蛋白的正確折疊，潛在地增加了可溶性重組蛋白的產(chǎn)率和
活性，克服重組蛋白的錯誤折疊和不溶性。該菌株又具備λ噬菌體 DE3 基因區(qū)，可以表達 T7 RNA 聚合酶，適用于含有 T7 啟動子
的原核表達載體（如 pET 等）的高效表達。非 T7 啟動子的表達載體（如 pGEX、pMal，pTrc 等載體）也可以在該菌株中表達。
ArcticExpress(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制成，pUC19 質粒檢測轉化效率大于 1×107 cfu/μg DNA。
基因型: F – ompT hsdS(rB– mB –) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte (cpn10 cpn60 Gentr )
菌株抗性：具有、四環(huán)素抗性。對氨芐、、、、敏感。
質粒轉化步驟：
1.將感受態(tài)細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入質粒 DNA 或 5-10μl 連接產(chǎn)物到細胞中，用手指管底，輕輕混勻；
2.冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動；
3.42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動；
4.冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動；
5.加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基；
6.置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有 20ug/ml 的和適當濃度的轉化質粒的抗性抗生素的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，
37℃培養(yǎng) 12-16 小時。
（平板劃線分離法：復蘇培養(yǎng)結束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，
取 10μl 重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更多更大
的單克隆菌落。）
蛋白表達步驟：
1.挑取單菌落，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中；
2.37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細菌至對數(shù)生長期（OD600=0.4-0.8）；
3.加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM，37℃誘導 2-4 小時或 16℃誘導過夜；
（低溫誘導方法：37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細菌到 1-2 個 OD 左右，然后將培養(yǎng)物降溫至 10–13°C，低溫培養(yǎng) 15 分鐘達到平衡，將
IPTG 添加到搖瓶中，最終濃度達到為 0.1-0.5mM 之間。繼續(xù)誘導培養(yǎng) 12-24 小時。）
4.誘導完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍染膠法，Western-Blot 法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總蛋白、
上清和沉淀組分，明確表達產(chǎn)物的表達狀況（可溶性或不溶性表達）；
5.大量表達時，可用 10ml 過夜培養(yǎng)物轉接到 1L 培養(yǎng)基中，當培養(yǎng)到 OD600=0.4-0.8 時，加入終濃度為 0.4mM 的 IPTG，37℃誘導2-4 小時或 16℃誘導過夜（不同蛋白表達的條件有所不同，需在實驗中優(yōu)化


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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達系統(tǒng)穩(wěn)定表達蛋白 1000 余種。


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