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BL21(DE3) 大腸桿菌表達感受態(tài)細胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC201-01 BC201-02
BL21(DE3) Competent cells 10×100µl 20×100µl
pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。
產(chǎn)品介紹：
本公司生產(chǎn)的 BL21(DE3)感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 BL21(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，
可用于 DNA 的化學轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達 10 7 cfu/µg，-70℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生
改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價廉。
基因型：F-ompT hsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)
產(chǎn)品特點：
該感受態(tài)細胞用于以 T7 RNA 聚合酶為表達系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7 噬菌體 RNA 聚合酶
基因的表達受控于λ噬菌體 DE3 區(qū)的 lacUV5 啟動子，該區(qū)域整合于 BL21 的染色體上。該菌適合于非毒性蛋
白的表達。
操作步驟（以下操作均按無菌條件的標準進行）：
提示
?
感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
?
進行轉(zhuǎn)化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。
?
為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到。
1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。
（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用 DNA 體積
不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。）以下實驗以 100μl 感受態(tài)細胞為例。
2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。
3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細胞冷卻 2 分鐘，該過程不要
搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置
5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）
4. 向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 150rpm，搖床
振蕩培養(yǎng) 60 分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將
細胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。（涂布用量可根據(jù)具
體實驗來調(diào)整。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)
化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。
相關試劑及培養(yǎng)基的制備方法：
1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的
去離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝
后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。
2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的
去離子水，溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調(diào) pH 至 7.0。加
入去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2溶液（此種
培養(yǎng)基稱為 SOB）。再補加經(jīng) 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）。
3. 轉(zhuǎn)化復蘇細菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基，無菌狀態(tài)按 1ml
每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支?？梢詷O大地避
免培養(yǎng)基污染和減少勞動量。
4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌20分鐘。冷
卻至 50℃左右時加入相應濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細菌用的無菌
培養(yǎng)皿中，等瓊脂凝固后即可使用。
5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無菌0.22μm
過濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細胞、 外泌體、ELISA 試劑盒、 抗體、重組蛋白及相關試劑。產(chǎn)品在免疫學、信號轉(zhuǎn)導、代謝、 神經(jīng)科學等領域內(nèi)都有科學文獻發(fā)表，被國內(nèi)外多所大學、研究機構和藥學平臺使用并發(fā)表文獻多達1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認可。
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重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達系統(tǒng)穩(wěn)定表達蛋白 1000 余種。


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