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Rosetta(DE3) 大腸桿菌表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品信息：

組成 BC204-01 BC204-02

Rosetta(DE3) Competent 10×100µl 20×100µl

cells pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl

儲(chǔ)存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品介紹：

本公司生產(chǎn)的Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)

胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107 cfu/µg，-70℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)

生改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實(shí)驗(yàn)的成本。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。

基因型：F-ompThsdSB(rB- mB-)galdcmlacY1(DE3)pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL)(Camr )

抗生素耐藥性：細(xì)胞具有抗性。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

該菌株是攜帶抗性質(zhì)粒 BL21 的衍生菌，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的 6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA,

CUA,CCC, GGA)對應(yīng)的 tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。

操作步驟（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）：

提示

感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。

為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到。

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。

（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用 DNA 體積

不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。）以下實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA ，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。

3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻 2 分鐘，該過程不

要搖動(dòng)離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進(jìn)行，時(shí)間不需十分準(zhǔn)確，夏季或室溫較高時(shí)，可放

置

5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時(shí)間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）

4. 向每個(gè)離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于

37℃ ，150rpm，搖床振蕩培養(yǎng) 60 分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細(xì)菌涂布器或玻璃珠將

細(xì)胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。（涂布用量可根據(jù)具

體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)

化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

相關(guān)試劑及培養(yǎng)基的制備方法：

1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的去

離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝

后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。

2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的

去離子水，溶解后再補(bǔ)加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調(diào) pH 至 7.0。加入

去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時(shí)加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2 溶液（此種培養(yǎng)

基稱為 SOB）。再補(bǔ)加經(jīng) 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）。

3. 轉(zhuǎn)化復(fù)蘇細(xì)菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基，無菌狀態(tài)按 1ml

每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支?？梢詷O大地避

免培養(yǎng)基污染和減少勞動(dòng)量。

4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。冷

卻至 50℃左右時(shí)加入相應(yīng)濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細(xì)菌用的無菌

培養(yǎng)皿中，等瓊脂凝固后即可使用。

5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無菌 0.22μm

過濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。

6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。

E 、感受態(tài)細(xì)胞
E-1 、大腸桿菌克隆感受態(tài)細(xì)胞
貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC101-01	0 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC101-02	0 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC102-01	DH5α 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC102-02	DH5α 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC103-01	JM109 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC103-02	JM109 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC104-01	XL1-Blue 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC104-02	XL1-Blue 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC105-01	Mach 1-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC105-02	Mach 1-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC117-01	Turbo 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×10	包
BC117-02	Turbo 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC118-01	Stable 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC106-01	DH10B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC106-02	DH10B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC107-01	OmniMAX2-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC107-02	OmniMAX2-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC108-01	Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC115-01	Stbl4 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC109-01	XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC110-01	JM110 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC111-01	DB3. 1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC112-01	DH10BAC 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC113-01	NEB 10-beta 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC114-01	BJ5183-AD- 1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
E-2 、大腸桿菌表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC201-01	BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC201-02	BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC202-01	BL21(DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC202-02	BL21(DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC203-01	M15 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC203-02	M15 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC204-01	Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC204-02	Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC205-01	OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC205-02	OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC206-01	T7 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC206-02	T7 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC207-01	T7pLysY 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC207-02	T7pLysY 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC208-01	Shuffle T7-K12 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC208-02	Shuffle T7-K12 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC209-01	Shuffle T7-B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC209-02	Shuffle T7-B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
E-3 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC401-01	NEB 10-beta 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC402-01	BJ5183 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC403-01	BJ5183-AD- 1 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC404-01	0 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC405-01	DH5α 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
E-4 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC301-01	LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC302-01	AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC303-01	EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC304-01	GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
E-5 、農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC305-01	LBA4404 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC306-01	AGL1 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受電轉(zhuǎn)態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC307-01	EHA105 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC308-01	GV3101 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包

南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細(xì)胞、外泌體、ELISA 試劑盒、抗體、重組蛋白及相關(guān)試劑。產(chǎn)品在免疫學(xué)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝、神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻(xiàn)發(fā)表，被國內(nèi)外多所大學(xué)、研究機(jī)構(gòu)和藥學(xué)平臺(tái)使用并發(fā)表文獻(xiàn)多達(dá)1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認(rèn)可。
品牌優(yōu)勢
1、產(chǎn)品優(yōu)勢：產(chǎn)品具有高特異性、回收率高、線性好、變異系數(shù)低、穩(wěn)定性好；
2、質(zhì)量保證：產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，每批次產(chǎn)品必須通過 QA、QC 檢測才可出庫；
3、實(shí)力強(qiáng)大： 標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室、研發(fā)中心，動(dòng)物房；
4、技術(shù)支持：技術(shù)部 5*8 小時(shí)技術(shù)問題及時(shí)解答；
5、服務(wù)周到：發(fā)貨及時(shí)，三個(gè)工作日順豐快遞；售后無憂，包退包換。
6、研發(fā)、生產(chǎn)科研產(chǎn)品：ELISA 試劑盒：人、大小鼠、牛、兔、山羊、倉鼠、豬、馬、雞、犬、豚鼠、猴、綿羊等多種屬1000多種指標(biāo)；
抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。