BJ5183-AD- 1 大腸 返回列表頁

BJ5183-AD-1 感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC114-01
BJ5183-AD-1 Competent cells 20×100μl
pAdTrack-CMV（10ng/μl） 5μl
儲(chǔ)存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明：
BJ5183-AD-1菌株攜帶的pAdEasy-1質(zhì)粒包含了大部分人腺病毒5型的基因組序列（E1/E3基因缺失），表達(dá)
可供pAdEasy-1骨架質(zhì)粒和pAdEasy穿梭質(zhì)粒進(jìn)行同源重組的所有組分，產(chǎn)生重組腺病毒質(zhì)粒。pAdEasy-1為
33.5kb，具有氨芐抗性，一旦與穿梭載體重組，其抗性消失?？剐缘膒AdTrack-CMV質(zhì)粒檢測感
受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率大于103 cfu/μg。
基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR ) [pAdEasy-1 (AmpR )]
菌株抗性：對(duì)敏感，有和氨芐抗性
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入目的質(zhì)粒（含有目的基因并線性化）到細(xì)
胞中，用手指管底，輕輕混勻；
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動(dòng)；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動(dòng)；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動(dòng)；
5. 加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基；
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl
吸頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平
板上的液體來回劃線。這個(gè)方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）
He, T. C., Zhou, S., da Costa, L. T., Yu, J., Kinzler, K. W. et al. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95(5):2509-14.