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產(chǎn)品名稱：LICCF人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞、LICCF人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞、LICCF人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞、LICCF人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞；

常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理方式

1.收到常溫細(xì)胞后，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

2.鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象，方便后續(xù)售后處理。

3.用 75%酒精擦拭瓶身，置于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4h 后進行傳代操作。

4.觀察細(xì)胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代，請根據(jù)實際情況決定)，傳代推薦比例 1：2 到 1：3（按實際收貨細(xì)胞密度決定，若不確定可聯(lián)系技術(shù)支持）；若細(xì)胞密度不到 80%則可取出部分培養(yǎng)基留 6ml 左右原瓶培養(yǎng) 基繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細(xì)胞。

5.由于氣溫，運輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的，請將細(xì)胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代（參考附件），或及時聯(lián)系技術(shù)支持進行指導(dǎo)傳代。

6.若觀察到異常或者對細(xì)胞有疑問，請及時跟代理商或者我們聯(lián)系；對于細(xì)胞培養(yǎng)操作及培養(yǎng)注意事項有疑問的，可跟我們的技術(shù)支持交流。

附:收到貼壁細(xì)胞漂浮處理方法（部分細(xì)胞由于貼壁松散，會出現(xiàn)運輸后漂浮，冬天氣溫低時也會出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮，屬于不可避免因素，正確處理后都可以正常生長）

1、將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞（1200rpm 3min）去除舊培養(yǎng)基；

2、用 PBS 重懸細(xì)胞，將所有細(xì)胞收集到一個離心管中，再次離心（1200rpm 3min）去除 PBS；

3、加入 1ml 左右 0.25%重懸細(xì)胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時間（TM3、TM4、293 系列約 1~2 分鐘）；

4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團分散，迅速加入 3-5ml 含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心（1200rpm 3min）去除；

5、加入 5ml 左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中；

6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞，若有 3-5 個成團的小細(xì)胞團可不用重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞傳代

1. 從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄；

2. 用不含鈣、鎂的沖洗細(xì)胞（每10cm 2培養(yǎng)表面積約2mL溶液）；從與貼壁細(xì)胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動細(xì)胞層，前后搖晃容器數(shù)次（注：沖洗步驟可去除可能抑制解離劑作用的少量

血清、鈣和鎂）；

3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的解離劑；試劑量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層(每10cm 2大約0.5mL)；

4. 輕輕搖晃容器，使試劑覆蓋細(xì)胞層；吸出多余解離試劑，T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶留 200ul 左右即可；

5. 將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘（請注意實際孵育時間根據(jù)所用細(xì)胞不同而有所差異）；

6. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況；如果解離程度未達(dá) 90%，可將孵育時間延長幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況；也可輕輕拍打培養(yǎng)容器以加快細(xì)胞解離；

7. 細(xì)胞解離程度大于等于 90%時，傾斜培養(yǎng)容器，使細(xì)胞上液體盡快流盡；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱生長培養(yǎng)基；吹打細(xì)胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；

8. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL 無菌離心管中，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘（請注意離心速度和時間依細(xì)胞種類不同而有所差異）；

9. 用最少體積的預(yù)熱生長培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液按照推薦比例稀釋，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，把細(xì)胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋旋松，以便進行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋）。

南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細(xì)胞、外泌體、ELISA 試劑盒、抗體、重組蛋白及相關(guān)試劑。產(chǎn)品在免疫學(xué)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝、神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻(xiàn)發(fā)表，被國內(nèi)外多所大學(xué)、研究機構(gòu)和藥學(xué)平臺使用并發(fā)表文獻(xiàn)多達(dá)1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認(rèn)可。
品牌優(yōu)勢
1、產(chǎn)品優(yōu)勢：產(chǎn)品具有高特異性、回收率高、線性好、變異系數(shù)低、穩(wěn)定性好；
2、質(zhì)量保證：產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，每批次產(chǎn)品必須通過 QA、QC 檢測才可出庫；
3、實力強大： 標(biāo)準(zhǔn)實驗室、研發(fā)中心，動物房；
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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。