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當(dāng)前位置:上海富雨生物科技有限公司>>細(xì)胞庫 / 細(xì)胞培養(yǎng)>>ATCC細(xì)胞>> Mccoy小鼠成纖維細(xì)胞、Mc
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更新時間:2025-02-12 09:30:05瀏覽次數(shù):26次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)產(chǎn)品名稱:Mccoy小鼠成纖維細(xì)胞、Mccoy小鼠成纖維細(xì)胞、Mccoy小鼠成纖維細(xì)胞、Mccoy小鼠成纖維細(xì)胞;產(chǎn)品基本信息 細(xì)胞名稱:McCoy,小鼠成纖維細(xì)胞 種屬來源:小鼠 組織來源:皮膚 細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞 生長特性:貼壁生長 培養(yǎng)基::90% DMEM+10% FBS+PS。 生長條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ 傳代方法:1:2至1:3,每周 3次 凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存 支原體檢測:無 細(xì)胞培養(yǎng)操作 1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例; a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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