產(chǎn)品名稱:U937人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞、U937人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞、U937人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞、U937人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理方式
1.收到常溫細(xì)胞后,及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。
2.鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象,拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象,方便后續(xù)售后處理。
3.用 75%酒精擦拭瓶身,置于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4h 后進行傳代操作。
4.觀察細(xì)胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代,請根據(jù)實際情況決定),傳代推薦比例 1:2 到 1:3(按實際收貨細(xì)胞密度決定,若不確定可聯(lián)系技術(shù)支持);若細(xì)胞密度不到 80%則可取出部分培養(yǎng)基留 6ml 左右原瓶培養(yǎng) 基繼續(xù)培養(yǎng),注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋;懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細(xì)胞。
5.由于氣溫,運輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的,請將細(xì)胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代(參考附件),或及時聯(lián)系技術(shù)支持進行指導(dǎo)傳代。
6.若觀察到異?;蛘邔?xì)胞有疑問,請及時跟代理商或者我們聯(lián)系;對于細(xì)胞培養(yǎng)操 作及培養(yǎng)注意事項有疑問的,可跟我們的技術(shù)支持交流。
附:收到貼壁細(xì)胞漂浮處理方法(部分細(xì)胞由于貼壁松散,會出現(xiàn)運輸后漂浮,冬天氣溫低時也會出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮,屬于不可避免因素,正確處理后都可以正常生長)
1、將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,離心收集細(xì)胞(1200rpm 3min)去除 舊培養(yǎng)基;
2、用 PBS 重懸細(xì)胞,將所有細(xì)胞收集到一個離心管中,再次離心(1200rpm 3min)去除 PBS;
3、加入 1ml 左右 0.25%重懸細(xì)胞,混勻即可,不能吹打太多次,放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時間(TM3、TM4、293 系列約 1~2 分 鐘);
4、消化好后,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團分散,迅速加入 3-5ml 含 血清的培 養(yǎng)基混勻以終止消化,離心(1200rpm 3min)去除;
5、加入 5ml 左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻,按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中;
6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞,若有 3-5 個成團的小細(xì)胞團可不用重新消化,使之貼壁后待細(xì)胞生長穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。
貼壁細(xì)胞傳代
1. 從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄;
2. 用不含鈣、鎂的沖洗細(xì)胞(每10cm 2培養(yǎng)表面積約2mL溶液);從與貼壁細(xì)胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液,以避免攪動細(xì)胞層,前后搖晃容器數(shù)次(注:沖洗步驟可去除可能抑制解離劑作用的少量
血清、鈣和鎂);
3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄,向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的解離劑;試劑量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層(每10cm 2大約0.5mL);
4. 輕輕搖晃容器,使試劑覆蓋細(xì)胞層;吸出多余解離試劑,T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶留 200ul 左右即可;
5. 將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘(請注意實際孵育時間根據(jù)所用細(xì)胞不同而有所差異);
6. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況;如果解離程度未達 90%,可將孵育時間 延長幾分鐘,每 30 秒鐘檢查一次解離情況;也可輕輕拍打培養(yǎng)容器以加快細(xì)胞解離;
7. 細(xì)胞解離程度大于等于 90%時,傾斜培養(yǎng)容器,使細(xì)胞上液體盡快流盡;加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱生長培養(yǎng)基;吹打細(xì)胞層表面數(shù)次,使培養(yǎng)基分散;
8. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL 無菌離心管中,以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘 (請注意離心速度和時間依細(xì)胞種類不同而有所差異);
9. 用最少體積的預(yù)熱生長培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將細(xì)胞懸液按照 推薦比例稀釋,并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中,把細(xì)胞放回培養(yǎng)箱(注:如果使用培養(yǎng)瓶,將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋旋松,以便進行充分的氣體交換,除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋)。