小鼠神經(jīng)干細胞（原代） 返回列表頁

一、小鼠神經(jīng)干細胞（原代）簡介：

神經(jīng)干細胞是多能干細胞，可以分化為神經(jīng)系統(tǒng)的多種細胞，包括神經(jīng)元、星形膠質細胞、少突膠質細胞等等。神經(jīng)干細胞可以從哺乳動物大腦的不同區(qū)域和脊髓等神經(jīng)系統(tǒng)中分離出來。神經(jīng)干細胞有重建神經(jīng)環(huán)路的能力，因此具有治療腦組織損傷的潛能，從而在研究神經(jīng)退行性疾病動物模型、遺傳性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、中風和脊髓損傷等方面有著廣泛的研究。  

本公司生產(chǎn)的小鼠神經(jīng)干細胞采用酶解法制備而來，細胞總量約為5×105/T25方瓶，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。  

二、小鼠神經(jīng)干細胞（原代）使用方法：  

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：  

取出T25方瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注：先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡），最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。  

2、細胞傳代：  

1細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3棄上清，沉淀細胞用10ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；  

4待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。  

3、細胞凍存：  

1細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3用適當量的凍存液（培養(yǎng)液：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；  

4先將細胞凍存管放置于-20℃1h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。  

4、細胞復蘇：  

1從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；  

2將凍存管中的細胞轉移至含5ml培養(yǎng)液無菌離心管中，1000rpm離心5min，然后加入5ml培養(yǎng)液混勻細胞，將細胞懸液轉移至T25培養(yǎng)瓶中，放置于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；  

3第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。