會(huì)員.png)
5
當(dāng)前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術(shù)文章>>PriCells: 小鼠單個(gè)核細(xì)胞分離去除脾臟細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞
PriCells: 小鼠單個(gè)核細(xì)胞分離去除脾臟細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞
PriCells: 小鼠單個(gè)核細(xì)胞分離去除脾臟細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞
脾臟細(xì)胞懸液在進(jìn)行淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)之前最好先去除紅細(xì)胞（RBC）。胸腺和淋巴結(jié)細(xì)胞懸液則不必去除紅細(xì)胞。脾臟細(xì)胞的亞群分離也需先去除紅細(xì)胞。
附加材料：
ACK裂解緩沖液
實(shí)驗(yàn)方案：
1. 每個(gè)脾臟用約5ml裂解緩沖液懸浮脾臟細(xì)胞；一個(gè)12ml試管可用于裂解一個(gè)或兩個(gè)脾臟，也可以用50ml離心管裂解更多的脾臟。
2. 室溫孵育5min，間以搖動(dòng)。
3. 加入洗液直至裝滿容器，以低速離心機(jī)上以200g離心10min后棄上清。再洗沉淀一次并以適量培養(yǎng)基重懸以便下一步操作（如去除死細(xì)胞、細(xì)胞計(jì)數(shù)或者細(xì)胞分離）。
附錄：ACK裂解緩沖液
8.29g NH4Cl（0.15mol/L）
1g KH2CO3（10.0mmol/L）
37.2mg Na2EDTA（0.1mmol/L）
加800ml水，用1mol/L鹽酸調(diào)PH至7.2～7.4
補(bǔ)加水至1L
0.2μm濾膜過濾除菌
室溫保存