PriCells: 正常大兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 正常大兔主動(dòng)脈

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2

3. 消化液：0.125%胰蛋白酶，0.1%膠原酶Ⅰ

4. 細(xì)胞培養(yǎng)瓶（T25）

5. 手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

6. 網(wǎng)篩（100目）

7. 離心管（15ml、50ml）

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 處死大兔，分離出主動(dòng)脈，放入預(yù)冷的含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復(fù)清洗3次。以洗去表面血絲和粘膜；

2. 將清洗過(guò)的大動(dòng)脈剪成2.5~3cm的血管段，剝離外膜;

3. 將去外膜的血管段放入培養(yǎng)皿中，縱向剪開管壁，然后使內(nèi)膜朝上，用小刀片輕輕刮去內(nèi)膜細(xì)胞。加1×PBS洗滌中膜3次，將中膜剪成1mm3的組織塊；

4. 將組織塊移入50ml離心管中，加入適量0.1%膠原酶Ⅰ溶液，在37℃恒溫箱中消化1~3h，至組織塊成絮狀為止；

5. 1000r/min，離心5min，去上清。再加入0.125%胰蛋白酶溶液，37℃水浴中攪拌消化5~10min。用含血清的培養(yǎng)基終止消化，吸管輕輕吹打2-3min，以得到分散的平滑肌細(xì)胞;

6. 過(guò)100目網(wǎng)篩，收集濾液，1000r/min離心5min，棄上清;

7. 加培養(yǎng)液重懸細(xì)胞、調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105個(gè)/ml，接種于培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

8. 兩天后第一次換液，之后每天換液一次;

9.PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

10.PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

11.PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

  12.PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒