PriCells: 正常大鼠巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)

實(shí)驗材料：

1. 成年大鼠或小鼠，采用腹腔取材法

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2

3. 培養(yǎng)基：RPMI1640、Ham’s F12等均適于巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)。大多數(shù)巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)可加10%-40%的血清，小鼠巨噬細(xì)胞加10%小牛血清，用無血清培養(yǎng)基亦可。新生小牛血清中含有抗體，能刺激巨噬細(xì)胞成熟，也可用乳清蛋白培養(yǎng)

4. 動物解剖臺或蠟板1個，帶鉤眼科鑷子2支，解剖剪1個，10ml注射器1個，針頭數(shù)支，離心管2支，吸管數(shù)支，培養(yǎng)瓶數(shù)個，血細(xì)胞計數(shù)器1個，Eagle液，肝素（10U/ml）30ml，Eagle培養(yǎng)液（含10%小牛血清和青霉素、鏈霉素）50ml

實(shí)驗方法：

1. 實(shí)驗前3d，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml；

2. 引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70%乙醇中3-5s。置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側(cè)，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁;

3. 再用70%乙醇擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同時從兩側(cè)用手揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動；

4. 用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側(cè)，使腹壁中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。小心拔出針頭，把液體注入離心管中，1000r/min，離心10min后，去上清，加10ml Eagle培養(yǎng)基；

5. 計數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生2×107—3×107個細(xì)胞，其中90%以上為巨噬細(xì)胞。為純化培養(yǎng)細(xì)胞，去除其他白細(xì)胞，接種數(shù)小時后，去除培養(yǎng)液，用Eagle液沖洗1—2次后，除去漂浮的細(xì)胞，得到貼壁的巨噬細(xì)胞。再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃、5%CO2溫箱中培養(yǎng)；

6. PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

7. PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

8. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

   9. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒