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PriCells: 正常大鼠巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常大鼠巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 成年大鼠或小鼠,采用腹腔取材法
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2
3. 培養(yǎng)基:RPMI1640、Ham’s F12等均適于巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)。大多數(shù)巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)可加10%-40%的血清,小鼠巨噬細(xì)胞加10%小牛血清,用無(wú)血清培養(yǎng)基亦可。新生小牛血清中含有抗體,能刺激巨噬細(xì)胞成熟,也可用乳清蛋白培養(yǎng)
4. 動(dòng)物解剖臺(tái)或蠟板1個(gè),帶鉤眼科鑷子2支,解剖剪1個(gè),10ml注射器1個(gè),針頭數(shù)支,離心管2支,吸管數(shù)支,培養(yǎng)瓶數(shù)個(gè),血細(xì)胞計(jì)數(shù)器1個(gè),Eagle液,肝素(10U/ml)30ml,Eagle培養(yǎng)液(含10%小牛血清和青霉素、鏈霉素)50ml
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 實(shí)驗(yàn)前3d,向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯1ml;
2. 引頸殺死動(dòng)物,手提鼠尾將全鼠浸入70%乙醇中3-5s。置動(dòng)物于解剖臺(tái)上,用針頭固定四肢,雙手持鑷撕開(kāi)皮膚拉向兩側(cè),暴露出腹膜,但勿傷及腹膜壁;
3. 再用70%乙醇擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同時(shí)從兩側(cè)用手揉壓腹膜壁,令液體在腹腔內(nèi)充分流動(dòng);
4. 用針頭輕輕挑起腹壁,使動(dòng)物體微傾向一側(cè),使腹壁中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。小心拔出針頭,把液體注入離心管中,1000r/min,離心10min后,去上清,加10ml Eagle培養(yǎng)基;
5. 計(jì)數(shù)細(xì)胞,每只小鼠可產(chǎn)生2×107—3×107個(gè)細(xì)胞,其中90%以上為巨噬細(xì)胞。為純化培養(yǎng)細(xì)胞,去除其他白細(xì)胞,接種數(shù)小時(shí)后,去除培養(yǎng)液,用Eagle液沖洗1—2次后,除去漂浮的細(xì)胞,得到貼壁的巨噬細(xì)胞。再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃、5%CO2溫箱中培養(yǎng);
6. PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
7. PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑
8. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒
9. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒