深圳市安培生物科技有限公司
中級會員 | 第5年

19126518388

血清系列
細胞轉染
支原體清除
細胞凍存
實驗耗材
分子試劑
細胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養(yǎng)基
ELISA試劑盒
TOYOBO（東洋紡）
ZYMO RESEARCH
Greiner（格瑞納）
IKA（艾卡）
化學發(fā)光底物（ECL）
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細胞生物學
Corning康寧
解離試劑
細胞類-實驗耗材
原代細胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細胞系
生化試劑盒
環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
類器官培養(yǎng)
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質
細胞因子分子
生物樣本庫

免疫熒光技術-間接法

時間：2021/10/26閱讀：1684
分享：
材料與儀器：

抗體
PBS 伊文氏蘭
顯微鏡


實驗步驟：

1. 標本固定后，PBS洗滌3x3 分鐘；

2. 滴加一抗，37 ℃40 分鐘或4 ℃過夜；

3. PBS洗3x3 分鐘；

4.  滴加熒光標記二抗37 ℃，40 分鐘；

5.  PBS洗3x3 分鐘；

6.  0.1 %伊文氏蘭復染；

7.  PBS洗3x3 分鐘；

8.  緩沖甘油封片，鏡檢。


要點：
1.種屬在進行雙重免疫標記時，要選擇來源于兩種不同種屬動物的一抗，如選擇來源于rabbit和mouse的抗體，二抗則用帶有不同熒光素標記的，如抗rabbit或抗mouse二抗， FITC和Tex-Red;
2.孵育時間和溫度相同的兩種一抗可以同時孵育，然后加入相對應的一抗的二抗進行孵育，一抗孵育時間室溫至少需要16h,二抗孵育室溫不宜超過4h,選擇4℃孵育比較好，背景比較清晰，另外孵育時夏天特別注意室溫溫度；
3.抗體稀釋液通常第一抗體選擇1%牛血清白蛋白進行稀釋，第二抗體選擇用0.01mol/L的PBS稀釋。



會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏！
標簽：
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用：

提示

X
您的留言已提交成功！我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言