提取質(zhì)粒DNA的方法有很多種，從提取產(chǎn)量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為堿裂解法、煮沸法等，各種不同的方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康目梢圆捎煤线m的提取方法。

堿裂解法：

使用堿與SDS裂解法從E. coli（大腸桿菌）中分離制備質(zhì)粒DNA已有30多年的歷史。將細(xì)菌懸浮液暴露于高pH值的強(qiáng)陰離子洗滌劑中，會(huì)使細(xì)胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質(zhì)變性，將質(zhì)粒DNA釋放到上清中。堿性溶劑使堿基配對(duì)*破壞，閉環(huán)的質(zhì)粒DNA雙鏈仍不會(huì)彼此分離，這因?yàn)樗鼈冊(cè)谕負(fù)鋵W(xué)上是相互纏繞的。只要OH-處理的強(qiáng)度和時(shí)間不要太過，當(dāng)pH值恢復(fù)到中性時(shí)，DNA雙鏈就會(huì)再次形成。在裂解過程中，細(xì)菌蛋白質(zhì)、破裂的細(xì)胞壁和變性的染色體DNA會(huì)相互纏繞成大型復(fù)合物，后者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當(dāng)用K+取代Na+時(shí)，復(fù)合物會(huì)從溶液中有效地沉淀下來，離心除去變性劑后，就可以從上清中回收復(fù)性的質(zhì)粒DNA。在SDS存在的條件下，堿水解是一項(xiàng)非常靈活的技術(shù)，它對(duì)E. coli的所有菌株都適用，并且其細(xì)菌培養(yǎng)物的體積可以從1-500mL以上。

質(zhì)粒小提試劑盒，它結(jié)合了優(yōu)化的堿裂解法，以及方便快捷的硅膜離心技術(shù)，具有高效，快捷的特點(diǎn)，能在30min內(nèi)完成全部操作。利用試劑盒能從1-5mL過夜培養(yǎng)的大腸桿菌菌液中純化得到10-40μg高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此質(zhì)粒DNA可直接用于DNA序列分析，各種酶促反應(yīng)，PCR以及部分細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染等。

煮沸法：

煮沸法是將細(xì)菌懸浮于含有Triton X-100和能消化細(xì)胞壁的溶菌酶的緩沖液中，然后加熱到100℃使其裂解。加熱除了破壞細(xì)菌外壁，還有助于解開DNA鏈的堿基配對(duì)，并使蛋白質(zhì)和染色體DNA變性。但是。閉環(huán)質(zhì)粒DNA鏈彼此不會(huì)分離，這是因?yàn)樗鼈兊牧姿岫ス羌芫哂谢ハ嗬p繞的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。當(dāng)溫度下降后，閉環(huán)DNA的堿基又各就各位，形成超螺旋分子，離心除去變性的染色體DNA和蛋白質(zhì)，就可從上清中回收質(zhì)粒DNA。煮沸裂解法對(duì)于小于15kb的小質(zhì)粒很有效，可用于提取少至lmL（小量制備），多至250mL（大量制備）菌液的質(zhì)粒，并且對(duì)大多數(shù)的大腸桿菌菌株都適用。但對(duì)于那些經(jīng)變性劑、溶菌酶及加熱處理后能釋放大量碳水化合物的大腸桿菌菌株，則不推薦使用該法。這是因?yàn)樘妓衔锖茈y除去，會(huì)抑制限制酶和聚合酶活性。若碳水化合物的量很大，在CsCl-溴化乙錠梯度離心中會(huì)使超螺旋質(zhì)粒DNA帶變得模糊不清。大腸桿菌菌株HBl01及其衍生菌株（其中包括TGl）能產(chǎn)生大量的碳水化合物，不適于用煮沸法裂解。

抽提竅門及注意事項(xiàng)：

1、加裂解液后，操作一定要溫和，劇烈混合會(huì)導(dǎo)致基因組DNA污染。

2、洗脫時(shí)60℃溫育（Ellution Buffer）洗脫緩沖液或去離子水效果更好。

3、若質(zhì)粒提取含量低，可增加菌液樣或換用ArtMedia Plasmid Culture，其比LB培養(yǎng)基質(zhì)粒得量高。

4、菌體應(yīng)*懸浮，如果沒有*懸浮菌體，則殘留的菌體團(tuán)塊在溶液 II 加入后，變成難以*裂解的團(tuán)塊。這個(gè)團(tuán)塊在溶液 III 加入后，會(huì)有一部分蛋白質(zhì)繼續(xù)存在于溶液中，成為蛋白質(zhì)殘留的最大根源。

5、加入溶液 II 后，混勻，體系最好能立即變得清澈。體系如果變得清澈了，馬上加入溶液 III 中和。

6、中和的操作，在 1.5ml 離心管中加入溶液 III 后，先顛倒兩次，使管底朝上，用指頭彈擊管底數(shù)次，再顛倒混勻。效果非常好。

設(shè)備推薦：冷凍離心機(jī)