河豚毒素檢測(cè)應(yīng)用方案
1、儀器配置
液相色譜儀、熒光檢測(cè)器、輸液泵、系統(tǒng)控制器、柱溫箱、萊博瑞特柱后衍生儀
2、色譜條件
檢測(cè)波長(zhǎng):波長(zhǎng)384nm 發(fā)射波長(zhǎng)505nm
流動(dòng)相:
A: 10mmol庚激發(fā)烷磺酸鈉+50mmol磷酸二氫鈉+50mmol磷酸氫二鈉
B: 乙腈
流速:0.4mL/min
柱溫:室溫
進(jìn)樣量:10uL
衍生試劑:萊博瑞特河豚毒素衍生試劑包
柱子:萊博瑞特C18柱
3、檢測(cè)
河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液:10ug/mL
標(biāo)準(zhǔn)溶液制備:0.03%乙酸溶液,0.45um過濾膜過濾
保留時(shí)間:14.413min
圖1河豚毒素
4、線性分析
標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ug/mL)
|
0.25
|
0.5
|
1.0
|
2.0
|
5.0
|
10.0
|
峰面積(MV)
|
1.95587
|
4.22334
|
8.01501
|
16.08575
|
40.12096
|
76.91632
|
河豚毒素是鲀魚類(俗稱河豚魚)及其它生物體內(nèi)含有的一種生物堿、為氨基全氫喹唑啉型化合物,是自然界中所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的神經(jīng)毒素之一,曾一度被認(rèn)為是自然界中毒性最強(qiáng)的非蛋白類毒素。毒素對(duì)腸道有局部刺激作用,吸收后迅速作用于神經(jīng)末梢和神經(jīng)中樞,可高選擇性和高親和性地阻斷神經(jīng)興奮膜上鈉離子通道,阻礙神經(jīng)傳導(dǎo),從而引起神經(jīng)麻痹而致死亡。
河豚毒素缺乏紫外、熒光和光化學(xué)特性,利用河豚毒素溶于弱酸的性質(zhì)進(jìn)行提取,在強(qiáng)堿中可產(chǎn)生具有熒光性衍生物的原理,采用柱后衍生-高效液相色譜熒光法進(jìn)行檢測(cè)。
我們?nèi)R博瑞特柱后衍生儀種類多、功能全,*具備檢測(cè)河豚毒素的要求,以下為河豚毒素試驗(yàn)譜圖:
國家標(biāo)準(zhǔn)要求貝類、魚類(不含其制品)中河豚毒素的定量限為0.25mg/kg。