抽象的

在二維 (2D) 表面上培養(yǎng)的脆弱細(xì)胞類型的分離會對細(xì)胞活力產(chǎn)生不利影響。生長在 2D 中的神經(jīng)元的 Accutase 治療會破壞脆弱的神經(jīng)元連接，導(dǎo)致體內(nèi)細(xì)胞死亡和宿主組織損傷。通過開發(fā)體外培養(yǎng)系統(tǒng)共同避免細(xì)胞脫離可以更好地保持細(xì)胞活力；因此，我們提出了一種可逆交聯(lián)三維 (3D) 水凝膠的合成，該水凝膠在交聯(lián)時將為培養(yǎng)/分化提供穩(wěn)定性，并在交聯(lián)降解后為移植提供可注射性。使用肟點(diǎn)擊化學(xué)將透明質(zhì)酸 (HA) 和甲基纖維素 (MC) 的混合物 HAMC 與酶可降解肽序列化學(xué)交聯(lián)。具體來說，HA 和 MC 分別被酮基和醛基修飾，合成TEV蛋白酶降解肽交聯(lián)劑，并用氧胺基團(tuán)修飾。對凝膠成分進(jìn)行了表征，形成的凝膠表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性、交聯(lián)降解后改善的可注射性以及與 iPSC 衍生的神經(jīng)祖細(xì)胞的細(xì)胞相容性

2.9 機(jī)械壓縮試驗

在 16 孔載玻片 (NuncTM Lab-TekTM) 中制備 100 µL HA×MC 水凝膠，用于機(jī)械壓縮測試。在 37°C 凝膠化后，凝膠在 PBS 中在 37°C 下溶脹 24 小時，然后進(jìn)行測試。準(zhǔn)備了 4 種不同條件（40、50、60 和 80% TEV-OA2 交聯(lián)），每種條件 4 次重復(fù)。用Kimwipe TM 從凝膠中除去過量的PBS，并將凝膠從腔室載玻片上分離。未立即測試的凝膠放置在帶有 1 mL PBS 的單獨(dú)培養(yǎng)皿中以防止干燥。在將每個凝膠單獨(dú)放置在預(yù)校準(zhǔn)的 Mach-1 微機(jī)械系統(tǒng) (Biomomentum) 中之前測量每個凝膠的直徑，該系統(tǒng)在連接到單軸負(fù)載傳感器 (150 g, ATI IndustrialAutomation) 的兩個壓板之間具有通用運(yùn)動控制器 (Newport)。先，使用 0.01 N 的力找到凝膠表面，并將凝膠高度記錄為下壓板與確定的凝膠表面之間的距離。進(jìn)行凝膠的初始壓縮（具有測量凝膠高度的 10% 的斜坡幅度、測量凝膠高度的 2% 的斜坡速度和 30 秒的固定弛豫時間）以去除表面不規(guī)則性。此后，進(jìn)行 5 次斜坡（斜坡幅度為測量凝膠高度的 2%，斜坡速度為測量凝膠高度的 2%，固定松弛時間為 30 秒），并使用 5 次斜坡的平均斜率計算凝膠的楊氏模量 進(jìn)行凝膠的初始壓縮（具有測量凝膠高度的 10% 的斜坡幅度、測量凝膠高度的 2% 的斜坡速度和 30 秒的固定弛豫時間）以去除表面不規(guī)則性。此后，進(jìn)行 5 次斜坡（斜坡幅度為測量凝膠高度的 2%，斜坡速度為測量凝膠高度的 2%，固定松弛時間為 30 秒），并使用 5 次斜坡的平均斜率計算凝膠的楊氏模量 進(jìn)行凝膠的初始壓縮（具有測量凝膠高度的 10% 的斜坡幅度、測量凝膠高度的 2% 的斜坡速度和 30 秒的固定弛豫時間）以去除表面不規(guī)則性。此后，進(jìn)行 5 次斜坡（斜坡幅度為測量凝膠高度的 2%，斜坡速度為測量凝膠高度的 2%，固定松弛時間為 30 秒），并使用 5 次斜坡的平均斜率計算凝膠的楊氏模量