總巰基測定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質(zhì)， 而且參與活性氧清除，后者對于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過測定總巰基含量和 GSH 含量，能夠間接測定蛋白質(zhì)巰基含量。
測定原理
巰基基團與 5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm 處有最大吸收峰。
自備實驗用品
天平、研缽、可見分光光度計、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 40 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 3 mL×1 瓶，4℃避光保存。
樣品的制備
（1） 動物、植物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。
（2） 血清，培養(yǎng)液：直接測定。
操作步驟
對照管 | 測定管 | |
樣品（μL） | 200 | 200 |
試劑一（μL） | 750 | 750 |
試劑二（μL） | 50 | |
H2O（μL） | 50 | |
混勻，25℃靜置 10min， 1cm 光徑玻璃比色皿，雙蒸水調(diào)零，測定 412nm 吸光值，ΔA=A 測定-A對照。 | ||
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