土壤幾丁質(zhì)酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）試劑盒說(shuō)明書

                                                 微量法100T/48S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)胞壁中，而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。

測(cè)定原理：

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物，在585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板，甲苯、蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體4mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體65mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。

測(cè)定操作表：

計(jì)算公式：

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值ΔA。

酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

土壤幾丁質(zhì)酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V反總÷W÷T×1000

= 598×（ΔA +0.0007）

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.315mL；W：樣本質(zhì)量，0.1g；T：反應(yīng)時(shí)間，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL

b.       用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值ΔA。

酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

土壤幾丁質(zhì)酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷2.6357×V反總÷W÷T×1000

= 1195×（ΔA +0.0007）

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.315mL；W：樣本質(zhì)量，0.1g；T：反應(yīng)時(shí)間，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL

注意事項(xiàng)：

試劑一充分混勻后再使用。

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