血磷濃度檢測試劑盒說明書

                                                   微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

血磷主要指血中的無機磷，以無機磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關系密切，在以mg/dL表示時，二者的乘積(［Ca］×［P］)為30～40。當(［Ca］×［P］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織；若(［Ca］×［P］)<35則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調節(jié)。

測定原理：

去除血清中有機磷后，無機磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，被硫酸亞鐵還原后呈藍色，在620nm有光吸收；通過測定620 nm吸光度，計算血液中磷含量。

自備儀器和用品：

離心機、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體1.6mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，依次加入11mL蒸餾水充分溶解，再加入試劑二，充分混合。

標準液：液體×1支，1 mmol/L無機磷，4℃保存。

血磷濃度測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長到620 nm，蒸餾水調零。

2. 取出標準液，室溫解凍。

3. 血清預處理：吸取50 μL血清，加950μL試劑一，混勻后室溫8000rpm，離心10min，取上清液，待測。

4. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL蒸餾水，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A空白管。

5. 標準管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL標準液，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A標準管。

6. 測定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL上清液，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

血磷濃度計算：

血磷含量（mmol/dL）=[C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=2×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)

C標準液：1 mmol/L；樣品稀釋倍數(shù)：（50 μL血清+950μL試劑一）÷50 μL血清=20；V樣總：100 mL=0.1 L。

注意事項：

1、   試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3天；

2、   測定過程中，應盡量避免溶血，因為紅細胞中有機磷酯進入血清后可被酶水解而使得血清無機磷含量增高。

3、   Z低檢出限為10μmol/L。

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