植物(PEPCase)酶活性測定試劑盒 ELISA法 返回列表頁

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被丙酮酸羧化酶（PEPCase）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙酮酸羧化酶（PEPCase）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法：

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。

3.  植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。

4.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

植物(PEPCase)酶活性測定試劑盒 ELISA法組成及其配置：

加樣注意事項：

1.     加樣前：溶液應(yīng)充分混勻。加樣時避免90度向孔中滴加液體，否則會導(dǎo)致液體殘留再吸頭上，從而導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確。正確的加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。

2.     加樣時：避免速度過快，否則無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性；避免液體濺出；

3.     加樣品時：單孔用量要求：≥50微升/指標(biāo)，如需要做2個復(fù)孔則血量≥100微升/指標(biāo)。

4.     每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個孔顯色時間相同。

5.     如果移液槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應(yīng)記錄實驗。

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