豬偽狂犬病毒抗體(PRV Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒 返回列表頁(yè)

檢測(cè)原理：試劑盒采用一步間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被偽狂犬病毒抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬偽狂犬病毒抗體的存在與否。

96T豬偽狂犬病毒抗體(PRV Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒組成及其配置：

①微孔酶標(biāo)板（ 12 孔×8 條）；

②陰性對(duì)照 0.5mL；

③陽(yáng)性對(duì)照 0.5mL；

④檢測(cè)抗原-HRP 10mL；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL；

⑥稀釋液 6mL；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL；

⑨終止液 6mL；

⑩封板膜 2 張；說(shuō)明書(shū) 1 份；自封袋 1 個(gè).

操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

樣品收集、處理及保存方法如下：豬偽狂犬病毒抗體(PRV Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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