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實(shí)驗(yàn)用小鼠β內(nèi)啡肽(βEP) ELISA檢測(cè)試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實(shí)驗(yàn)用小鼠β內(nèi)啡肽(βEP) ELISA檢測(cè)試劑盒性能:
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1) 為了避免交叉感染,配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽。
2) 混合或重溶蛋白溶液時(shí),盡量避免起沫。
3) 每次孵育時(shí),請(qǐng)使用正確的封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4) 終止液上板書匈奴應(yīng)同顯色底物上板順序一致;加入終止液后孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃;若孔內(nèi)有綠色,則表明孔內(nèi)液體未混勻請(qǐng)充分混合。
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