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基于Edman降解的蛋白N端序列分析檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

表達純化后的蛋白產(chǎn)物，特別是蛋白品的分析過程中，需要對蛋白的末端進行驗證，以保證表達純化產(chǎn)物的N端和C端序列準確。Edman降解法是蛋白的N端序列分析中非常成熟的方法之一，有著廣泛的應(yīng)用。百泰派克公司采用島津公司Edman測序系統(tǒng)，為廣大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產(chǎn)物、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務(wù)。采用我們的測序系統(tǒng)，可以測定N端30個氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統(tǒng)，可以測定N端的60-70個氨基酸。百泰派克公司也建立了以優(yōu)良的LC-MS/MS技術(shù)進行N-端測序的平臺，可以測出封閉和修飾的蛋白質(zhì)末端，與Edman降解法形成互補，保證N端測序服務(wù)的順利進行。 在蛋白質(zhì)測序前，蛋白樣品首先經(jīng)過SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿足測序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉(zhuǎn)移到PVDF膜上；經(jīng)過染色確定把蛋白條帶并切出；使用Edman測序儀對得到的PVDF膜上的蛋白樣品進行分析。Edman降解測序是通過循環(huán)反應(yīng)從蛋白質(zhì)的N端開始逐個鑒定氨基酸的種類，從而對蛋白質(zhì)的N端序列進行測定。每一個Edman測序反應(yīng)包括3步：dìyī步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結(jié)合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結(jié)合的殘基轉(zhuǎn)化成為更為穩(wěn)定的PTH殘基，經(jīng)過在線的HPLC分析，根據(jù)洗脫時間確定氨基酸種類。

Edman測序反應(yīng)過程

基于Edman降解的蛋白質(zhì)N端測序服務(wù)流程

Edman測序?qū)嶒灹鞒虉D

應(yīng)用領(lǐng)域

• 蛋白表達產(chǎn)物的驗證：重組蛋白插入位點和表達順序是否正確； • 細胞株建立和發(fā)酵過程中蛋白產(chǎn)物的驗證：驗證細胞株建立和發(fā)酵過程中蛋白產(chǎn)物N端jiǎliúānsuān和信號肽是否正確處理； • 蛋白降解/酶切分析：對降解/酶切形成的新蛋白片段N端進行分析，確定斷裂/酶切位點； • De-novo測序：對于蛋白數(shù)據(jù)庫中不存在的全新蛋白序列進行分析。

關(guān)于樣品

PVDF膜類樣品的準備過程 1.樣品電泳和電轉(zhuǎn) a. 對蛋白樣品進行1D或者2D跑膠 b. 將蛋白膠上的樣品轉(zhuǎn)移至PVDF膜上；注意：千萬不要使用硝酸纖維素膜（Nitrocellulose membranes） c. 在此過程中請佩戴手套和頭套，避免自身角蛋白對測序結(jié)果的影響 2.PVDF膜的染色 a. 染色過程中可以使用考馬斯亮藍或者立春紅對PVDF膜進行染色；注意：千萬不要使用銀染的方法進行染色 b. 染色完成之后，可以使用雙蒸水對PVDF膜進行清洗 c. 如果轉(zhuǎn)膜的緩沖液中含有g(shù)ānānsuān，需要對PVDF膜進行多次沖洗，以避免gānānsuān對后續(xù)分析的影響 d. 更詳細的樣品準備步驟，見Edman測序樣品準備Protocol 3.靶蛋白條帶獲取 a. PVDF膜染色后，靶條帶清晰可見，用潔凈的jiěpōudāo將靶蛋白條帶切下 b. 在蛋白量允許的情況下，可以準備2-3條靶條帶以增加靶蛋白的量 4.樣品運輸 對切下的蛋白條帶進行密閉包裝，使用冰袋運輸即可 溶液樣品的準備過程 1.蛋白的純度和用量 a. 樣品需要量在1-10 ug b. 樣品純度要＞90% c. Buffer中不要使用表面活性劑，并盡可能降低溶液的鹽濃度 d. Tris, glycine, guanidine, glycerol, sucrose, ethanolamine, SDS, Triton, X-100, Tween和其他的去垢劑，ammonium sulfate和其他的銨鹽均會對后續(xù)的氨基酸鑒定產(chǎn)生影響，在樣品準備過程中要避免使用 e. 樣品準備過程全程佩戴口罩和頭套，避免角蛋白的影響 2.蛋白樣品的運輸 a. 液體樣品推薦干冰運輸 b. 液體樣品也可以在冷凍抽干或者真空抽干后，使用冰袋運輸

研究案例

如下圖所示，通過Edman測序，可提供鑒定的氨基酸的詳細信息。

Edman測序研究案例

中/英文項目報告

在技術(shù)報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術(shù)報告，報告包括： 1. 實驗步驟（中英文） 2. 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)（中英文） 3. 蛋白質(zhì)N端測序的詳細信息 4. 質(zhì)譜圖片 5. 原始數(shù)據(jù)

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對蛋白質(zhì)序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對蛋白質(zhì)的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質(zhì)N端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的蛋白質(zhì)，提供基于從頭測序法的蛋白質(zhì)從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質(zhì)組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白質(zhì)組學、靶向蛋白質(zhì)組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質(zhì)組學分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質(zhì)組學服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種蛋白質(zhì)標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質(zhì)、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白質(zhì)組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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