細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

MCE 國際站：Apoptosis and Necrosis Assay Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：4℃ 保存 6 個月或者 -20℃ 保存一年。避光保存

簡介：MCE 細胞凋亡與壞死檢測試劑盒采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染的方法快速檢測細胞凋亡與細胞壞死。

概述：MCE 細胞凋亡與壞死檢測試劑盒采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染的方法快速檢測細胞凋亡與細胞壞死。Hoechst 33342 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。細胞凋亡時，細胞膜通透性增強，染色質(zhì)發(fā)生固縮，且凋亡細胞膜上的 p-糖蛋白泵功能受損而不能及時將 Hoechst 33342 排出細胞，故凋亡細胞經(jīng) Hoechst 33342 染色后熒光強度比正常細胞明顯增強。PI 是一種不能穿透細胞膜的紅色熒光染料，對于細胞膜完整的正常細胞和凋亡細胞不能染色，當(dāng)細胞壞死時，細胞膜的完整性喪失，可被 PI 染色。上述兩種染料雙染后，使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測，正常細胞為弱藍色熒光+弱紅色熒光，凋亡細胞為強藍色熒光+弱紅色熒光，壞死細胞為強藍色熒光+強紅色熒光。本試劑盒染色快速方便，僅需 20-30 分鐘即可完成一步染色，使用流式細胞儀檢測時，無需稀釋等配制過程，也無需準(zhǔn)備其他溶液。本試劑盒可檢測100 個樣品，每個樣品的細胞數(shù)量可為 105-106 個。

描述：

MCE 凋亡和壞死檢測試劑盒提供了一種快速方便的檢測細胞凋亡和壞死的方法。該試劑盒包含兩種與 DNA 結(jié)合的即用型染料。Hoechst 33342 是一種藍色熒光染料（與 DNA 結(jié)合時激發(fā)/發(fā)射最大值 ≈ 352/461 nm），它使凋亡細胞中濃縮的染色質(zhì)比正常細胞中的染色質(zhì)更亮。碘化丙啶 (PI) 是一種細胞膜不透性染料，其特征性激發(fā)最大值為 535 nm，發(fā)射最大值為 617 nm，可與核酸插入。同時使用這兩種染料可以通過流式細胞儀或熒光顯微鏡區(qū)分正常、凋亡和死亡細胞群。正常細胞顯示弱藍色熒光 + 弱紅色熒光，凋亡細胞顯示強藍色熒光 + 弱紅色熒光，壞死細胞顯示強藍色熒光 + 強紅色熒光。

本試劑盒一步染色僅需20-30分鐘，流式檢測時無需稀釋或配制其他溶液，每套試劑盒含有足夠100個樣本的試劑。

操作說明：1. 收集細胞懸浮細胞：在 1.5 mL 離心管中加入約 105-106 個細胞。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 重懸細胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min后棄去上清，保留細胞沉淀。貼壁細胞：棄去細胞培養(yǎng)液。加入胰蛋白酶消化細胞，制備單細胞懸液。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 重懸細胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。2. 雙染色2.1 加入 0.8-1 mL Cell Stain Buffer 重懸細胞。2.2 加入 5 μL Hoechst 33342 Stain。2.3 加入 5 μL PI Stain。2.4 充分混勻后冰浴或 4℃ 孵育 20-30 min。3. 檢測與分析3.1 流式細胞儀檢測：用流式細胞儀檢測熒光強度。3.2 熒光顯微鏡檢測：4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清，加入 PBS 洗滌一次，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。注：Hoechst 33342 和雙鏈 DNA 結(jié)合后，最大激發(fā)波長為 352 nm，最大發(fā)射波長為 461 nm；PI 和雙鏈 DNA 結(jié)合后，最大激發(fā)波長為 535 nm，最大發(fā)射波長為 617 nm

注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應(yīng)盡快檢測熒光強度。2. Hoechst 33342 和 PI 對光敏感，整個實驗過程盡量避光下進行。3. Hoechst 33342 和碘化丙啶（PI）均對人體有害，操作時務(wù)必小心。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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