細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

MCE 國(guó)際站：Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit (PI staining)

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：4℃ 保存 6 個(gè)月或者 -20℃ 保存一年。避光保存

簡(jiǎn)介：MCE 細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色的方法檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。

概述：MCE 細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色的方法檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。PI 是一種可嵌合到雙鏈 DNA 和 RNA 堿基對(duì)間的紅色熒光染料，與雙鏈 DNA 結(jié)合后可產(chǎn)生熒光，且熒光強(qiáng)度與雙鏈 DNA 的含量成正比。PI 染色后，假設(shè) G0/G1 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1，則含有雙份基因組 DNA 的 G2/M 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度理論上為 2，正在進(jìn)行DNA 復(fù)制的 S 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1-2。細(xì)胞凋亡時(shí)，由于細(xì)胞核皺縮和DNA 片段化，部分基因組 DNA 片段在染色過程中丟失，故經(jīng) PI 染色后熒光強(qiáng)度小于 1，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)后會(huì)出現(xiàn) sub-G1 峰，即凋亡細(xì)胞峰。此外，細(xì)胞凋亡時(shí)，細(xì)胞的光散射情況也會(huì)發(fā)生變化，在凋亡早期，染色質(zhì)皺縮，細(xì)胞密度增加，細(xì)胞對(duì)前向角光散射的能力顯著降低，而對(duì)側(cè)向角光散射能力增加或不變；但到了凋亡晚期，細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體，前向角和側(cè)向角光散射的信號(hào)均會(huì)降低。故可采用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞 DNA 含量及光散射情況進(jìn)行測(cè)定。本試劑盒可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的檢測(cè)，也可用于組織細(xì)胞的檢測(cè)。本試劑盒可檢測(cè) 50 個(gè)樣品，每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可為105-106 個(gè)。

描述：

MCE 細(xì)胞周期及凋亡分析試劑盒（PI 染色）為檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡提供了一種便捷的方法。DNA 的含量隨著細(xì)胞周期的進(jìn)程而變化。DNA 可用熒光染料如碘化丙啶 (PI) 染色，通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量其強(qiáng)度，以監(jiān)測(cè) G1/S/G2/M 期的細(xì)胞周期分布以及在亞 G1 區(qū)有信號(hào)的凋亡細(xì)胞。PI 是一種熒光插入劑，它通過插入堿基之間與 DNA 結(jié)合，幾乎沒有或沒有序列偏好。然而，PI 也與 RNA 結(jié)合，本試劑盒提供的 RNase A 可以消除 RNA 干擾。此外，光散射也會(huì)在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)生變化。在早期細(xì)胞凋亡中，來自前向散射 (FSC) 的光信號(hào)變?nèi)?，來自?cè)向散射 (SSC) 的信號(hào)增加或保持不變。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入晚期細(xì)胞凋亡階段時(shí)，來自 FSC/SSC 的信號(hào)均會(huì)減少。

操作說明：1. 收集細(xì)胞懸浮細(xì)胞：在 1.5 mL 離心管中加入約 105-106 個(gè)細(xì)胞。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 重懸細(xì)胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min后棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。貼壁細(xì)胞：棄去細(xì)胞培養(yǎng)液。加入胰蛋白酶消化細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 重懸細(xì)胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。組織細(xì)胞:用剪刀將組織塊剪成盡可能小的小塊,加入胰蛋白酶消化0.5-1h后經(jīng) 200-400 目篩網(wǎng)過濾得到單細(xì)胞懸液。4°C,1000g離心3-5 min,棄去上清。加入1mL預(yù)冷的PBS重懸細(xì)胞,4C,1000g離心3-5min,棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。2.固定細(xì)胞在上述收集的細(xì)胞沉淀中加入1mL預(yù)冷的 70%乙醇,輕輕吹打混勻,4℃固定2h或更長(zhǎng)時(shí)間。注:4C固定 12-24h效果更佳。3.清洗細(xì)胞4C,1000g離心3-5 min,棄去上清。加入1mL預(yù)冷的 PBS 重懸細(xì)胞,4C,1000g離心 3-5 min,棄去上清,保留細(xì)胞沉淀。4.配制PI染色工作液根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量配制適量的PI染色工作液。注:PI染色工作液4℃避光保存?zhèn)溆?24h有效。5.染色每個(gè)細(xì)胞樣品中加入0.5 mL PI染色工作液,輕輕重懸細(xì)胞沉淀,37C避光孵育30 min。6.檢測(cè)與分析用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm處檢測(cè)紅色熒光,并檢測(cè)光散射情況。用適當(dāng)軟件對(duì)DNA含量及光散射進(jìn)行分析。

注意事項(xiàng)：1. 熒光染料存在淬滅的問題，染色后應(yīng)盡快檢測(cè)熒光強(qiáng)度。2. PI 對(duì)光敏感，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程盡量避光下進(jìn)行。3. PI 對(duì)人體有害，操作時(shí)務(wù)必小心。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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