細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 (Hoechst法)

MCE 國(guó)際站：Cell Apoptosis Analysis Kit (Hoechst staining)

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：4oC 保存 6 個(gè)月或 -20oC 保存一年避光保存

簡(jiǎn)介：MCE 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 (Hoechst 法) 采用 Hoechst 33258 染色的方法快速檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

概述：MCE 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 (Hoechst 法) 采用 Hoechst 33258 染色的方法快速檢測(cè)細(xì)胞凋亡。Hoechst 33258 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。細(xì)胞凋亡時(shí)，細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，染色質(zhì)發(fā)生固縮，且凋亡細(xì)胞膜上的 p-糖蛋白泵功能受損而不能及時(shí)將 Hoechst 33258 排出細(xì)胞，故凋亡細(xì)胞經(jīng) Hoechst 33258 染色后熒光強(qiáng)度比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。使用熒光顯微鏡檢測(cè)時(shí)，正常細(xì)胞為弱藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞為強(qiáng)藍(lán)色熒光。本試劑盒常用于貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞及組織切片的細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色快速方便，最快僅需 25 分鐘即可完成。

描述：

MCE 細(xì)胞凋亡分析試劑盒（Hoechst 染色）提供了一種快速、方便的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。Hoechst 33258 是一種藍(lán)色熒光染料（與 dsDNA 結(jié)合時(shí)激發(fā)/發(fā)射最大值 ≈ 352/461 nm），它使凋亡細(xì)胞中濃縮的染色質(zhì)比正常細(xì)胞中的染色質(zhì)更亮。它在凋亡細(xì)胞中顯示強(qiáng)藍(lán)色熒光，但在正常細(xì)胞中僅顯示微弱熒光。

操作說(shuō)明：貼壁細(xì)胞1. 取一潔凈蓋玻片，用 70% 乙醇浸泡 5 min，無(wú)菌超凈臺(tái)中吹干備用。注：也可將蓋玻片用無(wú)菌 PBS 或 0.9% NaCl 洗滌三次，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一次后備用。2. 將蓋玻片置于六孔板，接種細(xì)胞，培養(yǎng)至細(xì)胞密度約 50-80%3.刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡。棄去培養(yǎng)液,加入0.5mL Fixative Solution,室溫固定10 min 以上。注:4℃ 固定過(guò)夜效果更佳。4.棄去 Fixative Solution,加入PBS 或 0.9% NaCI洗滌兩次,每次3min。5.加入0.5 mL Hoechst 33258 Stain,染色5min。6.棄去染色液,用 PBS 或0.9% NaCI洗滌兩次,每次3min。7.在載玻片上加一滴Antifade Mounting Medium,小心蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片。注意避免產(chǎn)生氣泡。8. 熒光顯微鏡下檢測(cè)熒光強(qiáng)度。注：Hoechst 33258 和雙鏈 DNA 結(jié)合后，最大激發(fā)波長(zhǎng)為 352 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 461 nm。懸浮細(xì)胞1.4°℃,1000 g 離心 3-5 min,收集10-10細(xì)胞。2.加入0.5 mL Fixative Solution,室溫固定10 min 以上。注:4°℃ 固定過(guò)夜效果更佳。3.4℃, 1000 g 離心 3-5 min,棄去Fixative Solution,加入PBS 或0.9% NaCl洗滌兩次,每次3min。4.加入約 50μL PBS或0.9% NaCI輕輕重懸細(xì)胞沉淀,并滴加至載玻片上。5.室溫下晾干至細(xì)胞不會(huì)輕易隨液體流動(dòng)。6.加0.5 mL Hoechst33258 Stain,染色5min。7.棄去染色液,用 PBS 或0.9%NaCI洗滌兩次,每次3min。8.在載玻片上加一滴Antifade Mounting Medium,小心蓋上蓋玻片。注意避免產(chǎn)生氣泡。9.熒光顯微鏡下檢測(cè)熒光強(qiáng)度。注:Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,最大激發(fā)波長(zhǎng)為352 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為461 nm。組織切片1.常規(guī)包埋切片后,將切片處理至可用于免疫組化染色。2.加入 PBS 或 0.9% NaCI洗滌兩次,每次3min。3.加入0.5 mL Hoechst 33258 Stain,染色5min。4.棄去染色液,用PBS 或0.9% NaCl洗滌兩次,每次3min。5.小心將切片置于載玻片上,加一滴Antifade Mounting Medium,小心蓋上蓋玻片。注意避免產(chǎn)生氣泡。6.熒光顯微鏡下檢測(cè)熒光強(qiáng)度。注:Hoechst 33258 和雙鏈DNA 結(jié)合后,最大激發(fā)波長(zhǎng)為352 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為461 nm。

注意事項(xiàng)：1. 熒光染料存在淬滅的問(wèn)題，染色后應(yīng)盡快檢測(cè)熒光強(qiáng)度。2. Hoechst 33258 對(duì)光敏感，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程盡量避光下進(jìn)行。3. Hoechst 33258 對(duì)人體有害，操作時(shí)務(wù)必小心。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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