MCE 國際站：Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20℃ 保存一年避光保存，避免反復(fù)凍融。

簡介：Annexin V-EGFP/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細(xì)胞凋亡。經(jīng) Annexin V-EGFP 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。 與 FITC 相比，EGFP 的綠色熒光更強(qiáng)，不易淬滅，穩(wěn)定性更高。

概述：MCE Annexin V-EGFP/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒采用 EGFP 標(biāo)記的重組人 Annexin PS）位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)；細(xì)胞凋亡早期，PS 會外翻到細(xì)胞膜外側(cè)。 Annexin V Annexin V 常作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。Annexin V 經(jīng) EGFP 標(biāo)記后可發(fā)綠色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生與 FITC 相比，EGFP 的綠色熒光更強(qiáng)，不易淬滅，穩(wěn)定性更高。此外，本試劑盒中的碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色液是一種不能穿透細(xì)胞膜的紅色熒光染料，可對凋亡晚期細(xì)胞及壞死細(xì)胞染色。經(jīng) Annexin V-EGFP 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無熒光（Annexin V-/PI 早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

描述：

MCE Annexin V-EGFP/PI 凋亡檢測試劑盒提供了一種快速、方便的方法來檢測細(xì)胞凋亡和壞死。在正?；罴?xì)胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)表面。在細(xì)胞凋亡開始時，PS 從膜的內(nèi)葉轉(zhuǎn)移到外葉。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca²⁺ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對 PS 具有高親和力。用綠色熒光 EGFP 標(biāo)記的 Annexin V 可以通過與外葉上暴露的 PS 結(jié)合來識別凋亡細(xì)胞。碘化丙啶 (PI) 是一種細(xì)胞膜不透性染料，對活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞有染色作用，但對晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞有染色作用，呈紅色熒光。染色后活細(xì)胞無熒光或僅有少量熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞呈紅色和綠色熒光（Annexin V+/PI+）。

操作說明：1. 收集細(xì)胞：收集 1-5 × 10 個細(xì)胞。懸浮細(xì)胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。貼壁細(xì)胞：小心吸取細(xì)胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結(jié)合）消化細(xì)胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細(xì)胞。3. 加入 5 μL Annexin V-EGFP，輕輕混勻。4. 加入 10 μL PI Stain，輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 10-20 min。注：孵育過程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強(qiáng)染色效果。6. 檢測與分析流式細(xì)胞儀檢測：用流式細(xì)胞儀檢測熒光強(qiáng)度。注：a. 流式檢測時，EGFP 最大激發(fā)波長為 488 nm，最大發(fā)射波長為 507 nm，在 FL1 通道檢測；PI-DNA 最大激發(fā)波長為 535 nm，最大發(fā)射波長為 617 nm，在 FL2 或FL3 通道檢測。b. 建議設(shè)置三組對照：未染色組、PI 單染組及 Annexin V-EGFP 單染組。熒光顯微鏡檢測：1000 g 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強(qiáng)度。

注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應(yīng)盡快檢測熒光強(qiáng)度，且整個實驗過程盡量避光下進(jìn)行。2. 若使用胰酶處理貼壁細(xì)胞，應(yīng)盡可能地去除胰酶，防止 Annexin V-EGFP 降解從而導(dǎo)致染色失敗。3. 流式細(xì)胞儀檢測時，若 Annexin V-EGFP 單獨染色組出現(xiàn)較多 PI 假陽性細(xì)胞，可用 PBS 將 Annexin V-EGFP 稀釋 3-10 倍后再進(jìn)行檢測。4. Annexin V-EGFP 和碘化丙啶（PI）均對人體有害，操作時務(wù)必小心。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Tetrahydrocortisol  | Epidermal growth factor (EGF) (phosphate)  | MAP1LC3B, Human  | Casimersen  | PFM39  | Emodepside  | GW806742X (hydrochloride)  | BD-3, Human  | Calcium ionophore I  | 2,7-Dichlorodihydrofluorescein

Trending products：Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Dye Reagents  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds