Annexin V-PE 細胞凋亡檢測試劑盒

MCE 國際站：Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20℃ 保存一年。避光保存，避免反復(fù)凍融

簡介：MCE Annexin V-PE 細胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細胞凋亡。經(jīng) Annexin V-PE 染色后，正常細胞基本無熒光，凋亡細胞及壞死細胞呈紅色熒光。

概述：MCE Annexin V-PE 細胞凋亡檢測試劑盒采用藻紅蛋白（Phycoerythrin, PE）標記的重組人 Annexin V 來檢測細胞凋亡。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine, PS）位于細胞膜內(nèi)側(cè)；細胞凋亡早期，PS 會外翻到細胞膜外側(cè)。Annexin V（膜聯(lián)蛋白 V）是一種 Ca 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可與 PS 特異性結(jié)合，因此 Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。Annexin V 經(jīng) PE 標記后可發(fā)紅色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。經(jīng) Annexin V-PE 染色后，正常細胞基本無熒光，凋亡細胞及壞死細胞呈紅色熒光。

描述：

MCE Annexin V-PE 凋亡檢測試劑盒提供了一種快速、方便的檢測細胞凋亡和壞死的方法。在正常活細胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細胞膜的細胞質(zhì)表面。在細胞凋亡開始時，PS 從膜的內(nèi)層轉(zhuǎn)移到外層。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對 PS 具有高親和力。用 Annexin V-PE 染色細胞后，活細胞幾乎不顯示熒光，凋亡細胞和壞死細胞顯示紅色熒光。

操作說明：1. 收集細胞：收集 1-5 × 105 個細胞。懸浮細胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。貼壁細胞：小心吸取細胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結(jié)合）消化細胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細胞。3. 加入 5 μL Annexin V-PE，輕輕混勻。注：可根據(jù)實際情況調(diào)整 Annexin V-PE 的使用量。4. 室溫下避光孵育 10-20 min。注：孵育過程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強染色效果。5. 檢測與分析流式細胞儀檢測：用流式細胞儀檢測熒光強度注：PE 可以被 495 nm、545 nm 或 564 nm 的激發(fā)光激發(fā)，發(fā)出峰值為 575 nm 的熒光。熒光顯微鏡檢測：1000 g 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度

注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應(yīng)盡快檢測熒光強度，且整個實驗過程盡量避光下進行。2. 若使用胰酶處理貼壁細胞，應(yīng)盡可能地去除胰酶，防止 Annexin V-PE 降解從而導(dǎo)致染色失敗。3. Annexin V-PE 對人體有害，操作時務(wù)必小心。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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