親和層析填料

親和層析填料：親和層析是基于生物分子與其他配基分子之間(如抗原與抗體、酶與底物、激素與受體、核酸中的互補(bǔ)鏈、多糖與蛋白復(fù)合體等)的特異性吸附原理建立和發(fā)展起來(lái)的。通過(guò)介質(zhì)上的配基與目標(biāo)分子之間的特異性吸附來(lái)實(shí)現(xiàn)純化目標(biāo)分子的目的。由于這種特異性的作用力，親和層析具有高度選擇性、高活性回收等特點(diǎn)。

1. His標(biāo)簽蛋白

過(guò)渡態(tài)金屬離子(Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+)能夠與電子供體，如N、S、O等原子以配位鍵結(jié)合，金屬離子上剩余的空軌道是電子供體的配位點(diǎn)，在溶液中會(huì)被水分子或陰離子占據(jù)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)表面氨基酸殘基(His)與金屬離子的結(jié)合力較強(qiáng)時(shí),氨基酸殘基的供電原子就會(huì)與金屬離子結(jié)合形成復(fù)合物，取代原先結(jié)合的水分子或陰離子，這樣就能使蛋白質(zhì)分子結(jié)合在固體表面。His標(biāo)簽蛋白的His和介質(zhì)結(jié)合，由于蛋白質(zhì)表面的氨基酸的種類、數(shù)量、位置和空間構(gòu)象不同,因而具體使用時(shí)根據(jù)金屬配基的親和力大小不同，選擇不同的金屬配基進(jìn)行分離純化。

★螯合離子(和His結(jié)合力)Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+,其中:Cu2+結(jié)合力強(qiáng),Ni2+常用,Co2+結(jié)合力較弱而分辨率高。

根據(jù)螯合方式不同，又分為IDA,IMAC,TED三種。

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2. GST標(biāo)簽蛋白

GST能特異的與GSH結(jié)合，表現(xiàn)為酶和底物的作用原理,利用這個(gè)原理，將GST做成標(biāo)簽表達(dá)出融合蛋白，與GSH配基的親和介質(zhì)特異性結(jié)合，從而純化出目標(biāo)蛋白。GST融合蛋白純化的特點(diǎn)是:純度高,純化條件溫和保持蛋白活性，促進(jìn)蛋白可溶性表達(dá)等。

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3. C3H7NO3蛋白酶

C3H7NO3蛋白酶純化親和介質(zhì)，是將C3H7NO3蛋白酶的廣譜抑制劑對(duì)氨基苯甲醍偶聯(lián)在瓊脂糖微球Focurose FF和高強(qiáng)度交聯(lián)的瓊脂糖Focurose 4FF制備而成，稱為Benzamidine Focurose FF(LS)和Benzamidine Focurose 4FF(HS)。

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4. Protein A/Protein G

將Protein A和Protein G等物質(zhì)偶聯(lián)在高強(qiáng)度交聯(lián)瓊脂糖上，廣泛用于抗體的純化。

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5. Plasmid

質(zhì)粒DNA是一類能在細(xì)菌染色體外自主復(fù)制的環(huán)形雙鏈DNA分子。不同類型的質(zhì)粒DNA分子量大小不同,大的可達(dá)到10^5kDa,小的則僅為10^3kDa左右。質(zhì)粒DNA的構(gòu)型一般分為超螺旋、幵口環(huán)狀或線性3種，此外它們各自還可能會(huì)形成聚體。初步純化的質(zhì)粒DNA溶液中?；煊?種構(gòu)型，并且摻雜一定量的蛋白質(zhì)、RNA、內(nèi)毒素以及宿主基因DNA,這些雜質(zhì)會(huì)影響后續(xù)的應(yīng)用，因此質(zhì)粒DNA需要進(jìn)一步精細(xì)純化。我公司具備成熟的質(zhì)粒純化整體解決方案（三步法、兩步法）和產(chǎn)品服務(wù)。Plasmid系列填料純化原理是利用配基的嗜硫吸附，適用于分離純化閉環(huán)的超螺旋質(zhì)粒DNA。

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6. 預(yù)活化

預(yù)活化介質(zhì)也稱為親和介質(zhì)活化中間體，是在各種交聯(lián)強(qiáng)度瓊脂糖的基礎(chǔ)上,通過(guò)不同的偶聯(lián)方法鍵合上不同的活性基團(tuán)（活性間隔臂）。通過(guò)活性基團(tuán)可進(jìn)一步偶聯(lián)各種配基，用于制備其它介質(zhì)（主要是親和介質(zhì)）及固定相應(yīng)物質(zhì),用戶可根據(jù)自己需求把待偶聯(lián)的配基很容易地偶聯(lián)上去，避免了前期接活性基團(tuán)的繁瑣工序。

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