細(xì)胞代謝線粒體呼吸分析儀

安捷倫 Seahorse XF Pro 細(xì)胞代謝線粒體呼吸分析儀以 96 孔規(guī)格測(cè)量并報(bào)告活細(xì)胞的耗氧率 (OCR)、質(zhì)子釋放率 (PER) 或細(xì)胞外酸化率 (ECAR) 以及 ATP 產(chǎn)生速率。該分析儀在低速率下具有出眾的 OCR 精度，具備經(jīng)驗(yàn)證的儀器性能、優(yōu)化的溫度控制，并且兼容自動(dòng)化。

OCR、PER 和 ATP 產(chǎn)生速率是能量代謝的關(guān)鍵測(cè)量，也是線粒體健康、毒性、糖酵解和總體細(xì)胞功能/功能障礙的重要指標(biāo)。綜合這些檢測(cè)結(jié)果可在系統(tǒng)水平表征培養(yǎng)細(xì)胞和體外樣品的細(xì)胞代謝功能。

XF Pro 分析儀也配備良好的軟件、標(biāo)準(zhǔn)化工作流程和安捷倫 Seahorse Analytics 軟件提供的高級(jí)數(shù)據(jù)分析功能。這些功能極大地簡(jiǎn)化了從檢測(cè)設(shè)計(jì)到數(shù)據(jù) QC 和解讀的整個(gè) XF 檢測(cè)過(guò)程。

特性

• 96 孔規(guī)格的細(xì)胞能量代謝活細(xì)胞實(shí)時(shí)分析平臺(tái)

• 每個(gè)檢測(cè)孔報(bào)告多個(gè)參數(shù)，包括 OCR、PER 或 ECAR以及 ATP 產(chǎn)生速率

• 在低速率下具有出色的OCR 精度，提高檢測(cè)靜息細(xì)胞類(lèi)型（如初始 T 細(xì)胞）時(shí)的可信度

• 高靈敏度 — 可分析定制 96 孔板中每孔僅 5,000 個(gè)細(xì)胞

• 兼容 XF Pro M板，減少邊緣效應(yīng)

• 具有自動(dòng)混合功能的四加藥口系統(tǒng)，能評(píng)估細(xì)胞對(duì)底物、抑制劑及其他化合物的即時(shí)反應(yīng)

• 經(jīng)驗(yàn)證的儀器性能，確保板內(nèi)和板間數(shù)據(jù)一致性

• 4 至 30 °C 的寬工作環(huán)境溫度，使該分析儀可維持 16 至 42 °C 的內(nèi)部檢測(cè)溫度

• 良好的 Pro Controller 軟件，具有用戶引導(dǎo)界面，可方便地創(chuàng)建檢測(cè)方案

• 在 Wave Pro 軟件中查看數(shù)據(jù)質(zhì)量，自動(dòng)標(biāo)記異常值

性能指標(biāo)

工作原理

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)微孔板中的活細(xì)胞生物能量代謝

線粒體呼吸和糖酵解這兩個(gè)主要的能量產(chǎn)生途徑，分別涉及細(xì)胞耗氧量和質(zhì)子釋放率。Seahorse XF 技術(shù)使用無(wú)標(biāo)記傳感器檢測(cè)這些分析物中的細(xì)胞外變化，以測(cè)定細(xì)胞呼吸率、糖酵解和 ATP 產(chǎn)生。將細(xì)胞接種于定制 96 孔 XF 微孔板的分析孔中，融合率為 50%–90%。懸浮細(xì)胞附著在孔底，實(shí)現(xiàn)靈敏度優(yōu)化。

形成微室，并以分鐘為單位計(jì)算細(xì)胞外流量的速率

儀器將探針板降低至分析孔中。傳感器位于孔底上方 200 µm 處，形成約 2 µL 的瞬時(shí)微室。隨著氧氣和 pH 水平的變化，儀器可讀取傳感器的相應(yīng)變化。通常進(jìn)行 3 分鐘測(cè)量，然后自動(dòng)計(jì)算速率。測(cè)量期結(jié)束后，升高探針，使細(xì)胞外培養(yǎng)基恢復(fù)到基線條件。

最多注入 4 種化合物，實(shí)時(shí)測(cè)試響應(yīng)或研究生物學(xué)機(jī)理

探針板還配置有加藥口（每孔 4 個(gè)），可在分析過(guò)程中將調(diào)節(jié)因子注入細(xì)胞孔中。當(dāng)完成儀器方案配置后，系統(tǒng)會(huì)將化合物“A"注入分析孔中，緩慢混合，確?；衔镌诜治雠囵B(yǎng)基中均勻分布。所有孔以此方式同步處理。系統(tǒng)將自動(dòng)執(zhí)行后續(xù)測(cè)量周期、方案規(guī)定的任何額外加藥及速率計(jì)算。

如何測(cè)量細(xì)胞外代謝流

安捷倫 Seahorse XF 細(xì)胞代謝線粒體呼吸分析儀以 5–8 分鐘左右的間隔測(cè)量耗氧率 (OCR) 和細(xì)胞外酸化率 (ECAR)。OCR 是線粒體呼吸作用的指標(biāo)，而 ECAR 主要由糖酵解產(chǎn)生。

通過(guò)隔離微孔板中單層細(xì)胞上極少量（約 2 μL）的培養(yǎng)基，實(shí)時(shí)測(cè)量 OCR 和 ECAR。

細(xì)胞耗氧量（呼吸）和質(zhì)子分泌（糖酵解）導(dǎo)致“瞬態(tài)微室"中溶解氧和游離質(zhì)子的濃度發(fā)生快速且易測(cè)量的變化，可由位于單層細(xì)胞上方 200 微米的固態(tài)傳感器探針每隔數(shù)秒進(jìn)行測(cè)量。儀器進(jìn)行 2–5 分鐘的濃度測(cè)量，然后分別計(jì)算 OCR 和 ECAR。

測(cè)量完成后，探針抬起，使得上部更多的培養(yǎng)基可進(jìn)入并與瞬態(tài)微室中的培養(yǎng)基混合，恢復(fù)細(xì)胞微環(huán)境至基線水平。集成的加藥系統(tǒng)可以按照用戶設(shè)置的間隔向每個(gè)孔中依次加入多達(dá) 4 種化合物。

應(yīng)用

探索細(xì)胞代謝的強(qiáng)大功能

安捷倫 Seahorse XF 平臺(tái)可實(shí)時(shí)測(cè)量活細(xì)胞的兩個(gè)主要代謝通路（線粒體呼吸和糖酵解），提供細(xì)胞生物能量代謝的功能動(dòng)力學(xué)測(cè)量。了解生物能量參數(shù)如何提供有價(jià)值的信息，并作為疾病模型、關(guān)鍵細(xì)胞過(guò)程和療法發(fā)現(xiàn)的指標(biāo)。

免疫代謝

包括激活、增殖和記憶細(xì)胞發(fā)育在內(nèi)的免疫細(xì)胞過(guò)程都是由代謝重編程驅(qū)動(dòng)的，代謝重編程可以被調(diào)節(jié)以增強(qiáng)性能和控制免疫細(xì)胞結(jié)局。通過(guò)功能性實(shí)時(shí)代謝測(cè)量，了解激活、增殖和記憶細(xì)胞發(fā)育等免疫細(xì)胞過(guò)程。

癌癥代謝

新陳代謝是癌癥惡性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素，為了總體上向糖酵解表型轉(zhuǎn)換，癌細(xì)胞增殖通常需要進(jìn)行上調(diào)或“代謝轉(zhuǎn)換"，從而加快能量需求并生成結(jié)構(gòu)單元，最終促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)功能性生物能量代謝分析，揭示癌癥代謝特性，更深入地了解癌細(xì)胞生物學(xué)。