土壤中性木聚糖酶（Soil Neutral Xylanase，S-NEX）測(cè)定
試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100T/48S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX 一般分離自最適生長(zhǎng)pH 為 6-8 的微生物。
測(cè)定原理：
NEX 在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在 540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率，可計(jì)算NEX 活力。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BO6091-100T/48S | Storage |
緩沖液：液體 | 10ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 3ml | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 10ml | 4℃避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
自備儀器和用品：
天平、常溫離心機(jī)、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。
樣品處理：
新鮮土樣風(fēng)干，過(guò) 30-50 目篩。
測(cè)定操作表：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm。
2、操作表
|
| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
|
土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
緩沖液（μl） | 150 | 100 |
試劑一（μl） |
| 50 |
混勻，50℃震蕩反應(yīng) 30min，立即 90℃水浴 10min，8000g，25℃離心 10min，取上清 100μl |
試劑二（μl） | 100 | 100 |
混勻，90℃水浴中顯色 5min，取 180μl 于微量石英比色皿/96 孔板測(cè)定 540nm 處吸光值 A，分別記為A 對(duì)照管、A 測(cè)定管，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。 |
S-NEX 計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.6904x + 0.0058，R2 = 0.9989
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
S-NEX 活力（μmol/d/g 土樣）=（△A-0.0058）÷ 1.6904×V 反總×103÷ W÷T÷ 150
= 28.4×（△A -0.0058）÷ W
V 反總：反應(yīng)總體積，0.15ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。 b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.8452x + 0.0058，R2 = 0.9989
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
S-NEX 活力（μmol/d/g 土樣）=（△A-0.0058）÷ 0.8452×V 反總×103÷ W÷T÷ 150
= 56.8×（A540-0.0058）÷ W
V 反總：反應(yīng)總體積，0.15ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。
注意事項(xiàng)：
1. 保證震蕩反應(yīng) 30min，使酶與底物充分接觸。
2. 注意 90℃水浴防止爆開(kāi)，以免改變反應(yīng)體系。
