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AAT Bioquest 17610 StrandBrite™ Green RNA Quantifying Reagent *200X DMSO Solution* 1ml

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest 17610 StrandBrite™ Green RNA Quantifying Reagent *200X DMSO Solution* 1ml，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號(hào)：17610

產(chǎn)品名稱：StrandBrite™綠色RNA定量試劑*200X二甲基亞砜溶液*

英文名稱：StrandBrite™ Green RNA Quantifying Reagent *200X DMSO Solution*

產(chǎn)品規(guī)格：1ml

 AATBioquest綠色RNA定量試劑二甲基亞砜溶液

產(chǎn)品說明：

檢測和定量少量 RNA 對于各種分子生物學(xué)程序非常重要，例如在進(jìn)行 Northern 印跡分析、S1 核酸酶測定、RNase 保護(hù)測定、cDNA 文庫制備、逆轉(zhuǎn)錄 PCR 和差異顯示 PCR 之前測量體外轉(zhuǎn)錄 RNA 的產(chǎn)量和測量 RNA 濃度。測量核酸濃度zui常用的技術(shù)是測定260nm處的吸光度。基于吸光度的方法的主要缺點(diǎn)是由蛋白質(zhì)、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物引起的干擾。使用靈敏的熒光核酸染色劑可以緩解這種干擾問題。StrandBrite™ RNA定量試劑是一種超靈敏的熒光核酸染色劑，用于定量溶液中的RNA。它是一種帶正電荷的熒光探針，與RNA的疏水口袋結(jié)合，并通過堆疊，疏水力，氫鍵和靜電相互作用的協(xié)同作用形成高發(fā)光復(fù)合物。StrandBrite™ RNA定量試劑具有極低的固有熒光，在與RNA結(jié)合時(shí)會(huì)顯著增強(qiáng)，從而大大增強(qiáng)其熒光。StrandBrite™ RNA定量試劑可以使用熒光酶標(biāo)儀或熒光計(jì)檢測低至5ng/mL RNA。

平臺(tái)

熒光酶標(biāo)儀

Excitation 490 納米

Emissio 525 納米

Cutoff     515 納米

推薦板 純黑色

示例協(xié)議

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

核糖核酸標(biāo)準(zhǔn)品

在DEPC處理過的水中制備100 ug/mL的RNA儲(chǔ)備溶液。從該儲(chǔ)備液中制備 2 ug/mL 的 TE 緩沖液，并進(jìn)行 1：2 稀釋以獲得 1000、500、250、125、62.5、31.3、15.6 和 0 ng/mL（空白）。

工作溶液的制備

斯特蘭璋綠色™工作解決方案

通過在TE中對濃縮的DMSO溶液進(jìn)行200倍稀釋（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，在DEPC處理過的水中pH 7.5）來制備StrandBrite™ Green的水性工作溶液。例如，將 50 μL StrandBrite™ Green 添加到 10 mL TE 緩沖液中，以制備足夠的工作溶液，以 100 μL 的最終體積測定 200 個(gè)樣品。用箔紙覆蓋或?qū)⑵浞旁诤诎抵?，保護(hù)工作溶液免受光照。

注意 我們建議將此溶液制備在塑料容器而不是玻璃中，因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。

注意 為獲得最佳效果，應(yīng)在制備后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)使用此解決方案。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

以下協(xié)議是使用StrandBrite Green定量RNA的示例。 在打開小瓶之前，讓StrandBrite™™ Green加熱至室溫。

注意 在處理所有材料時(shí)，請始終使用干凈的一次性手套，以防止RNase污染。

注意 沒有關(guān)于鏈輝™綠RNA染色的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑，并應(yīng)謹(jǐn)慎處理。

表 1.在純黑色 96 孔微孔板中排列 RNA 標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品。（RS = RNA標(biāo)準(zhǔn)品;BL = 空白控件;TS = 測試樣品）

表 2.每個(gè)孔的試劑組成（將15.6至1000 ng/mL的連續(xù)稀釋RNA標(biāo)準(zhǔn)品一式兩份添加到RS1至RS7的孔中）

運(yùn)行核糖核酸檢測

1. 向RNA標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和測試樣品的每個(gè)孔中加入100 μL鏈輝™綠工作溶液，使總RNA測定體積為200 μL/孔。                                               

注意 對于 384 孔板，每孔加入 25 μL 樣品和 25 μL StrandBrite™ Green 工作溶液。

2. 將反應(yīng)在室溫下孵育5至10分鐘，避光。

3. 用分光熒光計(jì)在Ex / Em = 490/525nm處監(jiān)測熒光增加（截止值為515nm）。

注意 為了盡量減少光漂白效應(yīng)，請保持所有樣品的熒光測量時(shí)間恒定。

4. 空白孔中的熒光（僅使用測定緩沖液）用作對照，并從具有RNA標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品的比色皿的值中減去。樣品的RNA濃度根據(jù)RNA標(biāo)準(zhǔn)曲線確定。 

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