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CCK-8試劑盒 (Cell Counting Kit-8, 20T):高效便捷的細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)工具
1. 實(shí)了個(gè)驗(yàn)cck8試劑盒:產(chǎn)品概述
CCK-8試劑盒(Cell Counting Kit-8)是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)的試劑盒。該試劑盒基于WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2H-四氮唑鈉鹽)化合物,在細(xì)胞存活的情況下,通過(guò)細(xì)胞脫氫酶作用將WST-8轉(zhuǎn)化為水溶性橙黃色甲臜(formazan)染料。生成的染料量與細(xì)胞數(shù)量成正比,因此可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)定量評(píng)估細(xì)胞增殖或毒性。
2. 實(shí)了個(gè)驗(yàn)cck8試劑盒:主要成分與功能
2.1 WST-8化合物
WST-8:WST-8是一種非放射性、無(wú)毒的四唑鹽,在活細(xì)胞中被脫氫酶還原生成橙黃色甲臜染料。由于生成的甲臜染料是水溶性的,避免了傳統(tǒng)MTT實(shí)驗(yàn)中使用有機(jī)溶劑的步驟,操作更加簡(jiǎn)便。
2.2 電子載體
電子載體:該試劑盒中的電子載體促進(jìn)了WST-8在細(xì)胞中電子轉(zhuǎn)移過(guò)程的高效進(jìn)行,從而確保了生成的甲臜量與細(xì)胞活性之間的線性關(guān)系。
3. 應(yīng)用領(lǐng)域
3.1 細(xì)胞增殖檢測(cè)
CCK-8試劑盒廣泛應(yīng)用于評(píng)估細(xì)胞增殖情況,適用于多種細(xì)胞類型,包括癌細(xì)胞、干細(xì)胞和原代細(xì)胞等。其操作簡(jiǎn)單,靈敏度高,可快速獲取結(jié)果,特別適合于高通量篩選實(shí)驗(yàn)。
3.2 細(xì)胞毒性檢測(cè)
該試劑盒也是評(píng)估藥物、化學(xué)品和其他處理對(duì)細(xì)胞毒性影響的常用工具。通過(guò)測(cè)定藥物處理后細(xì)胞活性的變化,研究人員可以確定藥物的IC50值或其他毒性參數(shù)。
3.3 藥物篩選
在藥物研發(fā)過(guò)程中,CCK-8試劑盒被廣泛用于初步篩選藥物候選化合物。其高靈敏度和高通量特性使其成為藥物篩選和藥理學(xué)研究的理想選擇。
4. 使用方法
使用CCK-8試劑盒進(jìn)行細(xì)胞增殖或毒性檢測(cè)的步驟如下:
細(xì)胞培養(yǎng):將待測(cè)細(xì)胞接種在96孔板中,按實(shí)驗(yàn)需求設(shè)定細(xì)胞數(shù)量和培養(yǎng)時(shí)間。
添加試劑:根據(jù)說(shuō)明書,將適量的CCK-8試劑添加到每個(gè)孔中(通常為10 µL/孔)。
孵育:將培養(yǎng)板放置在37°C、5% CO?的孵育箱中孵育1-4小時(shí)。孵育時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行優(yōu)化。
測(cè)定吸光度:使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定每個(gè)孔的吸光度值。吸光度值的大小與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。
數(shù)據(jù)分析:將測(cè)得的吸光度數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)算細(xì)胞增殖率或細(xì)胞毒性指標(biāo)。
5. 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
5.1 高靈敏度和廣泛適用性
CCK-8試劑盒具有高靈敏度,適合檢測(cè)低細(xì)胞數(shù)量的樣本。其對(duì)多種細(xì)胞類型的廣泛適用性使其成為細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的通用工具。
5.2 操作簡(jiǎn)便,無(wú)毒性
與傳統(tǒng)的MTT試劑相比,CCK-8不需要額外的溶解步驟,生成的產(chǎn)物是水溶性的,實(shí)驗(yàn)過(guò)程無(wú)毒且更為環(huán)保。
5.3 快速獲取結(jié)果
該試劑盒操作簡(jiǎn)便,通常在2-4小時(shí)內(nèi)即可獲得檢測(cè)結(jié)果,適合高通量實(shí)驗(yàn)和快速篩選應(yīng)用。
6. 注意事項(xiàng)
孵育時(shí)間:孵育時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行優(yōu)化,以確保獲得線性范圍內(nèi)的吸光度讀數(shù)。
保存條件:CCK-8試劑盒應(yīng)存放在4°C避光保存,避免反復(fù)凍融以保持試劑的活性。
酶標(biāo)儀校準(zhǔn):在使用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度前,確保儀器已正確校準(zhǔn),以獲得準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果。
7. 實(shí)驗(yàn)應(yīng)用實(shí)例
在抗癌藥物篩選實(shí)驗(yàn)中,研究人員使用CCK-8試劑盒評(píng)估了多種化合物對(duì)不同癌細(xì)胞系的抑制效果。通過(guò)測(cè)定吸光度變化,他們能夠快速確定各化合物的IC50值,從而篩選出具有潛力的候選藥物。
8. 總結(jié)
CCK-8試劑盒(20T)是一種高效、靈敏的細(xì)胞增殖和毒性檢測(cè)工具,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究和藥物篩選領(lǐng)域。其操作簡(jiǎn)單、結(jié)果可靠,是實(shí)驗(yàn)室中的檢測(cè)手段。無(wú)論是在基礎(chǔ)研究還是應(yīng)用開發(fā)中,CCK-8試劑盒都能為實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確、快速的結(jié)果,為科學(xué)研究的推進(jìn)提供有力支持。