外泌體凍干粉凍干后真?zhèn)文遗輽z測(cè)深度研究

外泌體凍干粉品質(zhì)核心：凍干后“真?zhèn)文遗?的深度檢測(cè)策略

1. 納米顆粒跟蹤分析（NTA）：基礎(chǔ)但關(guān)鍵。不僅看粒徑（是否仍分布在60-150nm），更要關(guān)注濃度回收率和粒徑分布變化。凍干后濃度大幅降低或出現(xiàn)大量>200nm的顆粒，提示存在聚集或破裂。

2. 冷凍透射電鏡（Cryo-ET）：形態(tài)學(xué)鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)"。能最真實(shí)地呈現(xiàn)復(fù)溶后囊泡的原始狀態(tài)，清晰顯示其是否仍為完整的“杯托狀"或球形結(jié)構(gòu)，有效區(qū)分于無(wú)定形的聚集體。

1. 納米流式細(xì)胞術(shù)：單囊泡水平檢測(cè)的利器。可同時(shí)對(duì)單個(gè)顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)并檢測(cè)其表面標(biāo)志物（如CD9、CD63）。直接計(jì)算出樣品中 “CD9+CD63+"雙陽(yáng)性顆粒的絕對(duì)濃度，精準(zhǔn)量化真實(shí)外泌體的比例，是鑒別真?zhèn)蔚淖钣辛ψC據(jù)之一。

2. 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）：驗(yàn)證外泌體標(biāo)志性蛋白（如TSG101, Alix）的存在，并確認(rèn)無(wú)細(xì)胞蛋白污染（如Calnexin陰性），確保凍干粉的分子身份和純度。

1. 膜完整性檢測(cè)：使用膜非透過(guò)性核酸染料。膜完整的囊泡會(huì)阻止染料進(jìn)入，熒光信號(hào)低。此實(shí)驗(yàn)可直接評(píng)估凍干過(guò)程對(duì)囊泡膜的損傷程度。

2. 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)：用熒光染料標(biāo)記外泌體膜，與細(xì)胞共培養(yǎng)后觀察熒光信號(hào)。成功被細(xì)胞攝取是外泌體功能活性的直接體現(xiàn)。