天津市蘭博實驗儀器設備有限公司

干貨 | HPLC柱前衍生和柱后衍生

時間:2020-10-13 閱讀:3227
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1、為什么要衍生

衍生化主要的目的就是提高目的物的可檢測性。對于GC來講,多數(shù)是為了增強目的物揮發(fā)性或者改善目的物極性;對于HPLC來講多數(shù)是為了提高檢測器對目的物的相應。

2、衍生化分類

柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在經(jīng)過分析柱前使分析物與衍生劑反應,反應產(chǎn)物在分析柱上實現(xiàn)分離,實際分離的是衍生產(chǎn)物,檢測的也是衍生產(chǎn)物;柱后衍生是分離物在分析柱中實現(xiàn)分離后,在衍生池內(nèi)與衍生劑反應,在柱子中分離的是目的物,在檢測器處檢測的衍生產(chǎn)物。

3、適用的化合物

生物酸/堿、胺類、抗生素(聚醚類抗生素多見)和氨基酸類。

4、衍生化要求

4.1 衍生劑必須過量且穩(wěn)定;不過量反應不*,檢測不充分。不穩(wěn)定,重現(xiàn)性差。

4.2 衍生物、衍生產(chǎn)物和衍生副產(chǎn)物至少是好分離的。

4.3 衍生反快速*。反應慢,柱前衍生還可以,但柱后不行。因為流速固定,衍生池管路長度一定,留給衍生化的時間是一定的。柱前衍生可以在系統(tǒng)外等衍生完畢后進樣,但也是影響效率的。

5、兩種衍生比較

柱前衍生優(yōu)點是,對設備要求不高,可以手工衍生,而且對衍生時間要求相對寬泛。缺點是,引入了過多的物質(zhì),如:衍生劑、衍生產(chǎn)物(當然這個是檢測需要的)和衍生副產(chǎn)物,對柱子有潛在的負面影響,另如采用手工衍生也會引入過多的認為因素。

柱后衍生優(yōu)點是,重現(xiàn)性好,認為因素少,引入物質(zhì)比較少。缺點是,可能有擴散問題,在柱子中分離結(jié)束后,就存在擴散,如果衍生慢(必然流速低)、管路長擴散問題就會比較嚴重,再有就是要求有一套外源的泵系統(tǒng)和一個檢測池,對于設備要求較高。

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