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更新時(shí)間：2021-10-29 11:26:45瀏覽次數(shù)：1192次

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免疫組化（用丙酮固定的冰凍切片）

請(qǐng)注意：不建議對(duì)（對(duì)）甲醛固定的樣品進(jìn)行免疫染色，因?yàn)樵谶@些條件下，大多數(shù)大鼠抗體在小鼠組織上只能產(chǎn)生較差的結(jié)果。

將冷凍組織的切片安裝在載玻片上，并在 4°C 的冰冷 100% 丙酮中固定 20 分鐘。在室溫下干燥樣品過夜。
為了盡量減少試劑體積，可以用防水筆在載玻片上的組織部分周圍畫一個(gè)疏水環(huán)。在接下來的所有程序中，這個(gè)被包圍的區(qū)域不應(yīng)干涸。因此，建議在潮濕的盒子中進(jìn)行孵化步驟。
在 PBS 中孵育幻燈片 20 分鐘。
當(dāng)使用過氧化物酶偶聯(lián)的二抗時(shí)，在室溫下用 0.03% H2O2 孵育載玻片 10 分鐘以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性。在 PBS 中沖洗載玻片 3 次，每次 5 分鐘。
將玻片在室溫下在封閉溶液（來自待使用的二抗宿主物種的血清）中孵育 1 小時(shí)，在 PBS 中稀釋 1:10 或 1:100。
用封閉溶液中的一抗 (2-10 µg/ml) 覆蓋載玻片，并在室溫下孵育 2 小時(shí)。
從載玻片上吸干多余的液體，并在 PBS 中沖洗 3 次，每次沖洗 5 分鐘。
根據(jù)制造商的說明，用在封閉溶液中稀釋的熒光團(tuán)或過氧化物酶偶聯(lián)的二抗（例如親和純化的驢抗大鼠 IgG-FITC 或 -HRP，Jackson ImmunoResearch，West Grove，PA）覆蓋載玻片。在 RT 中孵育 1 小時(shí)。
從載玻片上吸干多余的液體，并在 PBS 中沖洗 3 次，每次沖洗 5 分鐘。
a) 熒光染色的樣品可以通過熒光顯微鏡直接分析。
b) 為了觀察過氧化物酶標(biāo)記的結(jié)構(gòu)，用新鮮制備的 3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC) 底物蓋住載玻片并孵育直至在顯微鏡下可見紅色染色，時(shí)間可在 5 到 30 分鐘之間變化。在橙色背景染色發(fā)生之前用去離子水沖洗停止反應(yīng)。對(duì)于復(fù)染，用蘇木精孵育樣品 30-240 秒，并用流動(dòng)的溫水沖洗載玻片 20 分鐘。使用包埋水溶液（例如 Aquatex、Merck）安裝切片。

上海乾思生物科技中心成立于2018年，總部位于上海，是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的銷售型企業(yè)。
產(chǎn)品領(lǐng)域：分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療等領(lǐng)域。
主營產(chǎn)品：細(xì)胞和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
我們與全球上千家生物試劑供應(yīng)商保持著密切的合作關(guān)系，可以在第一時(shí)間為用戶提供前沿的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持。本著為所有的客戶提供更高品質(zhì)、更低價(jià)格、更快供貨、更優(yōu)服務(wù)的執(zhí)著精神，專心、專注的經(jīng)營方式和誠實(shí)做人、踏實(shí)做事的企業(yè)理念，我們一定會(huì)贏得更多客戶的親睞！