菌種保存管常見(jiàn)問(wèn)題解答

菌種保存管可保存一般細(xì)菌、苛刻菌，霉菌、酵母菌等真菌也可在低溫條件下通過(guò)菌種保存管保存，因此菌種保存管被廣泛應(yīng)用于臨床領(lǐng)域（臨床藥敏試驗(yàn)菌株的保存）、疾控領(lǐng)域（監(jiān)測(cè)分離到的菌株的保存）、菌種保存中心（菌株的日常取用與保存）以及制藥企業(yè)（陽(yáng)性對(duì)照菌株保存和取用）等領(lǐng)域。
友康菌種保存管（貨號(hào)：MS0101）采用瓷珠低溫冷凍保存法。管內(nèi)有25顆表面凹孔小瓷珠用于細(xì)菌的吸附和保存，可在保存周期內(nèi)使用25次（每次1個(gè)）。
低溫環(huán)境為優(yōu)良菌株提供一個(gè)適合長(zhǎng)期休眠的狀態(tài)，即干燥、低溫、缺乏氧氣和養(yǎng)料等，使微生物處于zui低代謝活動(dòng)狀態(tài)，但又不至于死亡，從而達(dá)到保藏的目的；小瓷珠經(jīng)特殊處理，外部密布凹進(jìn)的洞，菌株可牢固的吸附其上；保存液含有特殊低溫保護(hù)劑，可減少凍存過(guò)程中冰晶對(duì)菌種的影響。

菌種保存管常見(jiàn)問(wèn)題解答之保存條件

1、為什么菌種保存管說(shuō)明書(shū)上說(shuō)可在常溫下保存一年，產(chǎn)品畫(huà)冊(cè)又說(shuō)可以長(zhǎng)期保存？
答： 未使用的友康菌種保存管，可在常溫下保存1年。接菌后，低溫保存會(huì)使菌活性保持到zui低代謝活動(dòng)狀態(tài)，所以在-20℃可保存1-3年，-80℃或液氮環(huán)境下可保存5-10年。不同菌種及不同的保存溫度保存時(shí)間會(huì)有所不同，例如:大腸、沙門(mén)等常見(jiàn)細(xì)菌，-20℃可以保存到6年，但是苛刻菌(如流感嗜血桿菌、腦膜炎萘瑟氏菌)等特殊細(xì)菌保存時(shí)，需-80℃或更低溫度保存，才可以做到更長(zhǎng)期的保存。

2、友康菌種保存管在使用前需要放置冰箱嗎？
答： 使用前不需要放置冰箱。友康菌種保存管采用特殊生產(chǎn)工藝，并對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行長(zhǎng)期留樣觀察，以及穩(wěn)定性試驗(yàn)，在使用前可以室溫存放1年。

 
菌種保存管常見(jiàn)問(wèn)題解答之保存菌種

1、友康菌種保存管能保存霉菌及酵母菌嗎？
答：可以。對(duì)于霉菌等真菌需培養(yǎng)7天進(jìn)行保存，而酵母菌需培養(yǎng)3天，將孢子洗脫下來(lái)進(jìn)行保存，保存管中的小瓷珠可以作為介質(zhì)來(lái)吸附孢子和菌絲，相當(dāng)于砂土保存法中砂土做為載體起到的作用。

2、所有的菌都能保存嗎？如果不是的話，什么樣的菌可以保存？什么樣的菌不可以保存？
答： 從原理上講，所有菌種都可用瓷珠菌種保存管保存。菌種保存的原理是DNA復(fù)制時(shí)自發(fā)突變導(dǎo)致菌種退化，因此要?jiǎng)?chuàng)造代謝不活潑的狀態(tài)——干燥、低溫、缺氧、缺營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境，創(chuàng)造的環(huán)境越接近此狀態(tài)，所保存的菌種的時(shí)間就越長(zhǎng)。
但需要注意的是，由于苛刻菌(如流感嗜血桿菌、腦膜炎萘瑟氏菌)等特殊細(xì)菌保存時(shí)，需-80℃或更低溫度保存，才可以做到更長(zhǎng)期的保存。

3、我能用友康菌種保存管*保存菌株嗎？
答：溫度越低，保藏效果越好。從目前的試驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)際保存效果來(lái)看，-20℃可保存1-5年，-80℃或液氮中可保存5-10年，但需要特別注意的是——保存的菌種需每年抽檢進(jìn)行生化特征的鑒定，確定菌株無(wú)變異。

4、對(duì)于液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的純菌，是否也可以用咱們的友康菌種保存管？如果可以的話，怎么操作？
答：可以用友康菌種保存管，前提是保證液體培養(yǎng)基中的菌是純菌，可以直接離心，棄掉上清，然后把保存管中液體吸進(jìn)去充分混勻，然后再轉(zhuǎn)移到友康菌種保存管中，整個(gè)過(guò)程要注意無(wú)菌操作。不過(guò)，用友康菌種保存管，選擇平板菌落進(jìn)行保存，因?yàn)橐后w培養(yǎng)基中有雜菌是不易觀察出來(lái)的。

5、友康菌種保存管能否用于菌種的運(yùn)送，如果可以在什么條件下運(yùn)送？
答：就目前試驗(yàn)數(shù)據(jù)而言，我們只建議用于普通細(xì)菌的短期運(yùn)送，對(duì)于苛刻菌及厭氧菌不能用此方法，并且在運(yùn)送期間保存液不得吸出，2-8℃運(yùn)送不超過(guò)5天，運(yùn)送到客戶手中，需重新純化。另外需要說(shuō)明的是如弧菌屬的菌種需要常溫運(yùn)送，其對(duì)2-8℃溫度及其敏感。

 
菌種保存管常見(jiàn)問(wèn)題解答之使用中操作問(wèn)題

1、菌種保藏時(shí)為什么要進(jìn)行分離純化？
答：分離純化后才能獲得單一菌株，單一菌株進(jìn)行菌種保藏才有意義，防止菌種交叉污染和變異，這也是菌種保存的基本原則。

2、友康菌種保存管對(duì)于平板來(lái)說(shuō)，對(duì)挑選菌落個(gè)數(shù)有要求嗎？還是將整個(gè)平板的菌落全部刮入管中？
答：對(duì)于要保存的細(xì)菌一般是要進(jìn)行2-3次的純化，要保證一個(gè)平板上的菌是由單一菌落傳代而來(lái)的，所以在細(xì)菌保存的過(guò)程中，為了保證制備的菌懸液可以達(dá)到3-4麥?zhǔn)媳葷岫?，是可以將整個(gè)平板的的細(xì)菌全部刮到管中的，如果平板長(zhǎng)的比較滿一般半個(gè)平板的菌量就夠用，具體用量也根據(jù)菌種的不同有所差異，如霉菌、酵母菌在保存時(shí)，不適合用濁度法。

3、為什么在菌種保存時(shí)，要上下顛倒？為什么不能旋搖？
答：上下顛倒，可使菌懸液充分混勻，菌株充分、均勻地吸附到小瓷珠上，旋搖不利于菌懸液充分混勻，反而會(huì)使菌株全部沉淀于管底，有部分瓷珠吸附不到菌。

4、為什么在使用時(shí)要將管內(nèi)的液體盡可能多的吸出？
答：吸出液體可避免反復(fù)凍融形成的冰晶對(duì)菌株的損傷，加快復(fù)蘇的過(guò)程，因此，要盡可能的將與菌種混勻后的保存液吸凈。而常用的甘油法，在復(fù)蘇的過(guò)程中需用水浴鍋快速溶解，在此過(guò)程中，對(duì)菌株傷害較大，而且甘油法保存菌種，反復(fù)凍融，對(duì)菌株的傷害也是極大的。

5、在使用后，友康菌種保存管的保存環(huán)境？需要-80℃冰箱嗎？
答：友康菌種保存管采用的是低溫冷凍保存法，因此，使用后，需放置低溫環(huán)境，如-80℃或液氮中保存，而且溫度越低，保存效果越好。用戶需根據(jù)菌種的保存要求選擇具體保存溫度。

6、為什么說(shuō)，如果有條件的話，要將接菌的菌種保存管置于-80℃冰箱或液氮中？
答：因?yàn)?，貯存在-70℃以下低溫中能減少冰晶形成，可極大降低冰晶形成對(duì)細(xì)菌的傷害，同時(shí)可為被保存的菌種創(chuàng)造更低的代謝環(huán)境，從而延長(zhǎng)細(xì)菌保存的時(shí)間。

 
之復(fù)蘇菌種

1、為什么在復(fù)蘇菌株時(shí)，操作過(guò)程要求快速？
答：之所以要求快速?gòu)?fù)蘇，是因?yàn)樵诰N復(fù)蘇的過(guò)程中，長(zhǎng)時(shí)間的溶解過(guò)程會(huì)對(duì)所保存的菌種造成損傷，而YOCON經(jīng)過(guò)改良的保存方法zui大程度的避免復(fù)蘇所造成的影響，但我們還是建議遵循菌種的保存復(fù)蘇原則，保證所復(fù)蘇菌種的復(fù)蘇率。

2、將菌株反復(fù)凍融，到底對(duì)菌株有什么影響？
答：低溫會(huì)使菌株細(xì)胞內(nèi)的水分形成冰晶，從而引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)尤其是細(xì)胞膜的損傷。細(xì)胞體積大者一般要比較小者對(duì)低溫更為敏感，而無(wú)細(xì)胞壁者則比有細(xì)胞壁者敏感。如果放到低溫(不是一般冰箱)進(jìn)行冷凍時(shí)，會(huì)產(chǎn)生冰晶，冰晶呈針狀，極易導(dǎo)致細(xì)菌的嚴(yán)重?fù)p傷。用電鏡觀察，可見(jiàn)細(xì)菌的核膜上有大量針尖樣小孔，當(dāng)從低溫下移出并開(kāi)始升溫時(shí)，冰晶又會(huì)變大，故反復(fù)凍融，會(huì)對(duì)菌株造成極大損傷。
而瓷珠菌種保存管主要靠瓷珠保存菌種，復(fù)蘇時(shí)，只需將小瓷珠搖散，用接種針挑取瓷珠直接劃平板即可。

 
之其他問(wèn)題

1、為什么有時(shí)候菌種的保存效果不佳？
答：可能是由于保存后未將保存液吸盡，反復(fù)凍融形成冰晶損傷菌株細(xì)胞，影響了菌株活性；
確定所保存的菌種是否為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種，我們建議普通菌種保存為18小時(shí)內(nèi)的新鮮菌種，而霉菌和酵母菌需要保存其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期階段的菌種。

2、為什么我保存在平板上的菌每隔一段時(shí)間就得重新傳一次，即使是放在溫度為2-8度的冰箱中？
答：在2-8℃保存的菌種，并不是出于低代謝率的環(huán)境，所以此環(huán)境下保存的菌種極易變異，故一般一個(gè)月重新傳代一次，確定菌種有無(wú)變異，并且連續(xù)傳5代后的菌種不能使用。

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