NC0201 MDCK細胞無血清培養(yǎng)基
- 公司名稱 友康生物科技(北京)股份有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 NC0201
- 產(chǎn)地 北京市海淀區(qū)豐賢中路7號(孵化樓)三層304
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2019/10/16 13:48:42
- 訪問次數(shù) 1103
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500mL/瓶 |
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貨號 | NC0201 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 用于接種流感病毒后,維持MDCK細胞的生長。 |
一.MDCK細胞無血清培養(yǎng)基 產(chǎn)品用途
用于MDCK細胞的培養(yǎng)。在整個培養(yǎng)過程中不需要添加血清??蛇_到原來的DMEM+10%血清的效果。
提請注意:
1. 該產(chǎn)品為無血清培養(yǎng)基產(chǎn)品。不是添加了血清的細胞培養(yǎng)基。
2. 細胞可直接轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng),不需要經(jīng)過血清濃度逐步降低的過程,不需細胞馴化。細胞可直接轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng),不需要經(jīng)過血清濃度逐步降低的過程,不需細胞馴化。
二. MDCK細胞無血清培養(yǎng)基 產(chǎn)品規(guī)格
500ml/瓶。20瓶/箱。
三.MDCK細胞無血清培養(yǎng)基 產(chǎn)品性能
1. MDCK細胞培養(yǎng)基中加入了胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白以及所需要的貼壁因子等物質(zhì),其化學成分明確。在整個培養(yǎng)過程中不需要添加血清。
2. 細胞連續(xù)傳代32代,細胞特性沒有改變。
3. 細胞倍增時間小于16小時。
4. 細胞剛轉(zhuǎn)入無血清細胞培養(yǎng)基時,生長相比*培養(yǎng)基略有遲緩,經(jīng)過2-3代的傳代后,生長即可達到*培養(yǎng)基(90%DMEM+10%胎牛血清)所培養(yǎng)的水平。
四.MDCK細胞無血清培養(yǎng)基 使用說明
此產(chǎn)品的使用方法跟*培養(yǎng)基(DMEM+10%FBS)的相同。
不經(jīng)過血清馴化的MDCK細胞,前5代左右(與MDCK細胞的初始狀態(tài)有關(guān))狀態(tài)可能會稍差。
1、MDCK細胞復(fù)蘇
1)從液氮罐中取出凍存管迅速置于37℃水浴鍋中,使管中的液體在1min內(nèi)融化。
2)在超凈工作臺中用無菌吸管吸取10mL預(yù)溫的MDCK無血清培養(yǎng)基到15mL離心管中,凍存管用75%酒精擦拭表面后,將細胞懸液加入 15mL離心管中,吹吸混勻。
3)800rpm離心3min,去除上清液,用6mL預(yù)溫的無血清培養(yǎng)基重懸細胞,接種于T25細胞培養(yǎng)瓶中,接種細胞密度為5×105cells/mL。
4) 37℃,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)1-2天至細胞鋪滿瓶底的80%-90%進行傳代。
2、MDCK細胞傳代(以T25瓶為例)
1)處于對數(shù)生*的細胞長至融合度達到80%-90%時,棄去培養(yǎng)液,用PBS或不含鈣鎂的Hank's液清洗細胞3遍。
2)加入1mL基因重組胰蛋白酶,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中消化至細胞收縮變圓,輕拍培養(yǎng)瓶,鏡下可觀察到細胞移動加入培養(yǎng)基終止消化。
3)如果以1:6比例傳代,加入35mL MDCK無血清培養(yǎng)基。如果以1:4比例傳代,需加25mL MDCK無血清培養(yǎng)基。
?4)分瓶后,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞長滿瓶底80%-90%后進行下一次傳代(一般2-3天傳代一次)。
3、流感病毒的分離與培養(yǎng)
1) 選取融合度90%-100%且處于對數(shù)生*的MDCK細胞,棄去培養(yǎng)液,用PBS或不含鈣鎂的Hank’s液清洗細胞2-3遍。
2)加入200 μL的流感病毒樣本,溫和搖動數(shù)次。
3)置于37℃,5% CO 培養(yǎng)箱中吸附1-2小時。
4)吸出接種物,加入6 mL流感病毒分離無血清培養(yǎng)基(使用前需要添加抗生素及終濃度為2ug/mL的TPCK-胰酶)于培養(yǎng)瓶中,放置 于33℃-35℃,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每日觀察病變。
5)當75%-*的細胞出現(xiàn)病變時即可準備收獲病毒。
6)溫和搖動細胞瓶2-3次。將培養(yǎng)瓶中的病毒液置于15mL離心管中。
7)為了提高病毒滴度,可將離心管置于-70度冰箱或液氮上方反復(fù)凍融一到兩次。
8)收獲的病毒液可立即進行血凝試驗,或負80度冰箱冷凍*保存。
4、MDCK細胞凍存
1)選取融合度達80%-90%且處于對數(shù)生*的MDCK細胞用于凍存。
2)依據(jù)傳代方法把消化好的細胞收集于離心管并計數(shù),800rpm離心3min。
3)去除上清液,加入商品化的細胞凍存液(凍存液需要提前預(yù)冷),凍存液中細胞的密度為5×106 cells/mL。用吸管輕輕吹打使 細胞混勻,然后分裝至無菌凍存管中,每支凍存管加液1mL。
4)細胞經(jīng)過程序降溫后置于液氮中保存。(如用yocon無血清凍存液,無需程序降溫,直接-80℃凍存,12h后存入液氮,*保存。)
五.MDCK細胞無血清培養(yǎng)基 實驗數(shù)據(jù)
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MDCK細胞在無血清培養(yǎng)基中 | MDCK細胞在需血清培養(yǎng)基中 ?的培養(yǎng)狀態(tài)(200×鏡下) | |||
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MDCK細胞在無血清培養(yǎng)基中傳代第10代 | MDCK細胞在無血清培養(yǎng)基中傳代第20代 | |||
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MDCK細胞在無血清培養(yǎng)基中傳代第30代 | MDCK細胞在無血清培養(yǎng)基中傳代第32代 |