基于細胞的熒光法：一種新型抗體親和力檢測技術

在生物醫(yī)學研究和治療領域，單克隆抗體（mAbs）扮演著越來越重要的角色。特別是在癌癥和慢性疾病的治療中，抗體的親和力——即其與目標抗原結合的緊密程度，直接影響抗體藥物的治療效果。因此，開發(fā)一種既準確又可靠的抗體親和力測定方法，對于提高治療效率和開發(fā)新型抗體藥物至關重要。

傳統(tǒng)的親和力測定技術

目前存在多種測定抗體親和力的方法，如放射免疫分析、表面等離子共振（SPR）、流式細胞術、酶聯(lián)免疫吸附分析和動力學排阻分析等。作為一種成功的候選治療藥物，mAbs必須能識別目標抗原上的天然表位，因此需要一種更加快速靈敏、直觀簡便的測定方法。

基于細胞的熒光法：一種新的檢測技術

Yu等人在杜克大學醫(yī)學中心的研究中，開發(fā)了一種基于細胞的熒光檢測法（如基于細胞的ELISA法），用于測定抗體親和力。這種方法通過使用熒光標記的抗體，并將其加入到固定在96孔板上的抗原陽性和抗原陰性的細胞系中，通過計算特異性結合和非特異性結合的差值來測量抗體的親和力。

研究者通過與傳統(tǒng)的流式細胞術和放射性（I125）Scatchard分析方法進行比較，驗證了基于細胞的熒光法的有效性。結果顯示，新方法得到的解離常數(shù)KD值與傳統(tǒng)方法相當，證明了這一新技術的準確性和可靠性。

此外，研究還展示了如何使用這種熒光法進行競爭性結合分析，進一步驗證了抗體與抗原的特異性結合。這一功能對于研究抗體的結合表位和選擇高親和力抗體具有重要意義。

基于細胞的熒光法的優(yōu)勢

與流式細胞術和I125比色法等傳統(tǒng)方法相比，基于細胞的熒光法具有多項優(yōu)勢。首先，該方法不使用放射性同位素，減少了實驗的安全風險。其次，使用完整的細胞而非純化的蛋白質，能夠更真實地模擬抗體與天然抗原的相互作用。此外，該方法操作簡便，成本低廉，適合高通量篩選，且能夠在短時間內完成大量樣本的分析。

盡管基于細胞的熒光法具有諸多優(yōu)勢，但也存在一些局限性。例如，對于復雜樣品的處理可能會產生非特異性結合，導致結果的誤判。然而，隨著技術的不斷優(yōu)化和發(fā)展，這些問題有望得到解決。盡管目前還未有人利用基于細胞的熒光法來評估抗體親和力，但是其自身具備的優(yōu)勢表明該方法具有作為抗體親和力檢測方法的潛力，為抗體藥物的開發(fā)和研究提供強有力的支持。

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參考文獻：

Yu X, Pegram CN, Bigner DD, Chandramohan V. Development and validation of a cell-based fluorescent method for measuring antibody affinity. J Immunol Methods. 2017;442:49-53. doi:10.1016/j.jim.2016.12.004