抗血清制備必須注意的問題

  抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清，一般為動(dòng)物被人工注射某類抗原后制備的動(dòng)物血清。價(jià)的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。
  一種抗原能否引起抗體反應(yīng)，一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇（Antigenic 
determinant），另一方面取決于機(jī)體的免疫狀態(tài)，當(dāng)具備以上兩個(gè)條件后，抗體將遵循抗體的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng)。
  抗原的種類繁多，包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細(xì)胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫動(dòng)物具有不同的特殊性。一般*抗原免疫動(dòng)物需加用佐劑，尤其在使用可溶性抗原時(shí)，以期得到價(jià)的抗血清；合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物質(zhì)需先通過人工的方法與蛋白質(zhì)載體連接后再與佐劑混合免疫動(dòng)物，方可獲得理想的免疫效果。使用佐劑后可增加抗原的免疫原性和延長(zhǎng)抗原在機(jī)體內(nèi)存留的時(shí)間，從而改變了抗原原有的免疫原性。
其注意事項(xiàng)有如下幾點(diǎn)： 
  1、動(dòng)物的免疫反應(yīng)存在著個(gè)體差異，甚至有人報(bào)告不同品種動(dòng)物一次免疫后產(chǎn)生的抗體的差別可高達(dá)500倍，所以制備抗血清時(shí)不能只免疫一只動(dòng)物，一般免疫3～4只，因?yàn)橛械膭?dòng)物可能產(chǎn)生抗體效價(jià)很低或不產(chǎn)生抗體，免疫反應(yīng)好的動(dòng)物所能提供的抗體往往高于一般動(dòng)物3～4倍。
  2、制成的抗原乳劑是否為油包水乳劑應(yīng)進(jìn)行檢查，否則會(huì)影響免疫效果，如不是油包水乳劑，應(yīng)重新制備。
  3、要制備價(jià)的抗體，必須要加佐劑（一般采用*福氏佐劑），加佐劑后免疫動(dòng)物，抗體效價(jià)至少可增加5倍。但也應(yīng)考慮到，如果抗原中有微量的雜蛋白存在，即使0.005mg，亦可因有佐劑而產(chǎn)生非特異性的抗體，所以要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和抗原的純度適當(dāng)?shù)厥褂米魟?/span>
  4、分裝保存的抗血清應(yīng)注明抗血清的名稱，效價(jià)，制備日期以及包裝量。
  5、當(dāng)抗原量過少不易提純時(shí)，可采用抗原抗體在瓊脂擴(kuò)散中形成的沉淀線直接免疫動(dòng)物制備抗體。
  6、抗血清效價(jià)一般以抗血清稀釋倍數(shù)表示。血清效價(jià)的檢測(cè)方法很多，靈敏度各不同，因此在表示抗血清效價(jià)時(shí)，應(yīng)標(biāo)明檢測(cè)方法。另外，在沉淀反應(yīng)中，出現(xiàn)沉淀時(shí)的抗原、抗體比例有一較大的范圍，如用不同濃度的抗原測(cè)定效價(jià)時(shí)，結(jié)果會(huì)因此有別，所以在測(cè)定抗血清效價(jià)時(shí)，需注意抗原的濃度。
  7、為制備單價(jià)特異性高的抗血清，所用抗原純度越高越好，因此，在純化抗原過程中應(yīng)盡量除去可能存在的雜蛋白，這樣可以省去許多時(shí)間來吸收抗血清中的非特異性抗體。