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細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒基于細(xì)胞凋亡過(guò)程中的特定生物化學(xué)變化，通過(guò)特定的標(biāo)記物或染料來(lái)區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞。其原理主要利用凋亡細(xì)胞有的生物化學(xué)特征，如細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸(PS)的外翻、DNA的斷裂以及線粒體膜電位的改變等。
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒常用試劑盒類型：
Annexin V/PI檢測(cè)試劑盒：
原理：正常細(xì)胞中，PS只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)。細(xì)胞發(fā)生凋亡最早期，PS由內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。Annexin V與PS有高度親和力，因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。PI是一種核酸染料，不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加，PI能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此，將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來(lái)。
類型：根據(jù)熒光基團(tuán)的不同，Annexin V/PI檢測(cè)試劑盒可分為多種類型，如Annexin V-FITC/PI、Annexin V-APC/PI等。其中，Annexin V-FITC/PI適用于細(xì)胞沒(méi)有自發(fā)熒光的情況；而Annexin V-APC/PI則適用于細(xì)胞本身需要檢測(cè)綠色熒光的情況。但需要注意的是，APC和PI的熒光光譜有較大重疊，對(duì)檢測(cè)儀器和技術(shù)人員有較高要求。
TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒：
原理：細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA，產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端。3'-OH可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化作用下，與熒光染料結(jié)合，從而通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀直接進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。
應(yīng)用：TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒可用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。
Caspase 3/7活性檢測(cè)試劑盒：
原理：Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白酶家族，其中Caspase 3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究最多的caspase。Caspase 3/7可以催化底物產(chǎn)生黃色的熒光產(chǎn)物，通過(guò)測(cè)定熒光產(chǎn)物的吸光度來(lái)檢測(cè)Caspase 3/7的活性。
應(yīng)用：Caspase 3/7活性檢測(cè)試劑盒可用于檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中Caspase 3/7的活性，從而反映細(xì)胞凋亡的情況。
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