氯膦酸鹽脂質(zhì)體等三種單核巨噬細(xì)胞清除方法的對比知多少？

單核-巨噬細(xì)胞包括骨髓中的前單核細(xì)胞、外周血中的單核細(xì)胞、以及組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞(Mφ)。Mφ來源于血液中的單核細(xì)胞，而單核細(xì)胞又來源于骨髓中的前體細(xì)胞。單核細(xì)胞是一種單個(gè)核的吞噬細(xì)胞，來源于骨髓髓樣祖細(xì)胞，主要分布于血液循環(huán)系統(tǒng)，參與機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。單核細(xì)胞可分為經(jīng)典型(CD14++CDI6-)、中間型(CD14++CD16+)和非經(jīng)典型(CD14+CD16++)單核細(xì)胞。單核細(xì)胞表型分析，建議通過流式細(xì)胞術(shù)對循環(huán)單核細(xì)胞進(jìn)行亞群分析。

正常情況下，根據(jù)外周血單核細(xì)胞表面標(biāo)志物CD14和CD16的表達(dá)水平，單核細(xì)胞被劃分為三個(gè)主要亞群：經(jīng)典單核細(xì)胞（cMo，特征為CD14++CD16-），中間型單核細(xì)胞（iMo，表現(xiàn)為CD14++CD16+），以及非經(jīng)典或異型單核細(xì)胞（ncMo，通常定義為CD14-low/NEGCD16+）。在健康人中，cMo約占單核細(xì)胞總數(shù)的大約85%，而iMo占比約為5%，ncMo則大約占剩余的10%左右。

人，單核細(xì)胞可以根據(jù)表面CD14和CD16被細(xì)分為三個(gè)主要的亞群：

經(jīng)典單核細(xì)胞（CD14hiCD16-）：約90%的單核細(xì)胞屬于這一類，具有高CD14但不表達(dá)CD16。

中間單核細(xì)胞CD14hiCD16+）：高CD14和低CD16表達(dá)。

非經(jīng)典單核細(xì)胞（CD14-/lowCD16+）：具有相對較低CD14表達(dá)和高CD16。

小鼠，單核細(xì)胞根據(jù)表面標(biāo)志和功能特性被分為兩種主要類型：
經(jīng)典單核細(xì)胞：Classical Monocytes (CM)，（高表達(dá)Ly6C）：通過CCR2受體響應(yīng)CCL2（趨化因子），主要參與炎癥反應(yīng)，在組織損傷或感染時(shí)大量募集。
非經(jīng)典單核細(xì)胞： NonClassical Monocytes（NCM），（低表達(dá)Ly6C）：又被稱為巡邏型單核細(xì)胞，高表達(dá)CX3CR1受體，主要在血管壁內(nèi)爬行和監(jiān)視微環(huán)境，對組織修復(fù)和抗炎具有重要作用。

我們在清除單核巨噬細(xì)胞時(shí)，早期使用抗體CCR2，后來使用CD11b-DTR小鼠，再后來上世紀(jì)90年代末荷蘭免疫學(xué)家Nico VonRoojen教授開發(fā)了單核巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes氯膦酸鹽鹽脂質(zhì)體（商業(yè)化的荷蘭Liposoma品牌）。荷蘭Liposoma品牌Clodronate Liposomes氯膦酸鹽鹽脂質(zhì)體頻頻見刊于Cell，Nature和Science。但是這三種方法，對單核細(xì)胞的清除，有哪些差異呢？作為一個(gè)基礎(chǔ)研究，對我們設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)和選擇試劑很重要。尤其現(xiàn)在的研究，顆粒度和精準(zhǔn)度越來越高，簡單的黑盒實(shí)驗(yàn)，不能細(xì)分到具體的細(xì)胞亞群清除的差異，因此，我們可以參考JCI的這篇文獻(xiàn)。

論文信息：

論文題目： Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1β

期刊名稱：J Clin Invest.

時(shí)間期卷：2018;128(7):2833–2847

在線時(shí)間：2018年5月21日

DOI：doi.org/10.1172/JCI98436.

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體產(chǎn)品信息：

貨號：CP-005-005

規(guī)格：5ml+5ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes and Control Liposomes

辦事處：Target Technology（靶點(diǎn)科技）

正常小鼠，靜脈注射Clo-lip（Clodronate Liposomes，荷蘭Liposoma），腹腔注射DT（Listlabs），靜脈注射抗體CCR2。24小時(shí)后取樣外周血和脾臟。如下圖。

外周血：Clodronate Liposomes和DT，無論對于經(jīng)典單核細(xì)胞和非經(jīng)典單核細(xì)胞，都有顯著效果。尤其荷蘭Liposoma的Clodronate Liposomes，幾乎將Ly6C陽性的細(xì)胞都清除了。CCR2抗體主要清除類似招募的CM。

脾臟：CCR2抗體的清除效果模式類似外周血。荷蘭Liposoma的Clodronate Liposomes的脾臟NCM清除效果也很顯著。

對于這個(gè)數(shù)據(jù)，我們需要辯證的看。首先是注射方式，其次是注射劑量，還有取樣方法。此外，取樣時(shí)間點(diǎn)，選擇的Marker，還有樣品制備的方法，這些細(xì)節(jié)，都很重要。都是我們自己的數(shù)據(jù)和別人數(shù)據(jù)不一樣的原因。別的數(shù)據(jù)僅僅是參考，需要我們自己做出來，才是自己的。才有助于進(jìn)一步推進(jìn)自己的實(shí)驗(yàn)。