BAK1|β-膽固醇不敏感受體激酶1，助力植物細(xì)胞信號(hào)通路研究

BAK1（油菜素類(lèi)固醇不敏感1相關(guān)受體激酶1）在沒(méi)有b原體或誘導(dǎo)子的情況下控制與先天免疫相關(guān)的基因的表達(dá)。磷酸化Brl1。參與程序性細(xì)胞死亡（PCD）。亞細(xì)胞定位：細(xì)胞膜。替代名稱(chēng)：黃甾體類(lèi)殺蟲(chóng)劑1相關(guān)受體激酶1、BAK1、BRI-1相關(guān)受體激酶、RKS10、受體激酶樣SERK 10、SERK3、體細(xì)胞胚胎發(fā)生受體樣激酶3、ELG、ELONGATED、ATSERK3、體細(xì)胞胚發(fā)生受體樣酶3、ATBAK1。

艾美捷BAK1|β-膽固醇不敏感受體激酶1：

貨號(hào)：AS12-1858

免疫原：與KLH偶聯(lián)的肽段，來(lái)源于擬南芥Bak1序列，TAIR編號(hào)：AT4G33430，UniProt編號(hào)：Q94F62。

宿主：兔子

克隆性：多克隆

純度：免疫原親和純化的血清，溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）中。

形式：凍干

數(shù)量：50 µg

復(fù)溶：復(fù)溶時(shí)加入50 µl無(wú)菌水。

儲(chǔ)存：凍干品/復(fù)溶后儲(chǔ)存于-20°C；復(fù)溶后請(qǐng)分裝保存，避免反復(fù)凍融。打開(kāi)前請(qǐng)短暫離心管子，以避免因物質(zhì)粘附在管蓋或管壁上而導(dǎo)致的損失。

測(cè)試應(yīng)用：免疫沉淀（IP）、西方印跡（WB）

推薦稀釋度：2 µl/50 µl蛋白G瓊脂糖，1:5000（WB）

預(yù)期 | 表觀分子量：68 | 70 kDa

確認(rèn)的反應(yīng)性：擬南芥、番茄

預(yù)測(cè)的反應(yīng)性：鹽芥

未反應(yīng)的：大麥、生菜、本氏煙、水稻

應(yīng)用舉例：

圖：正確蛋白質(zhì)提取方法對(duì)檢測(cè)BAK1目標(biāo)條帶的貢獻(xiàn)示例

蛋白質(zhì)提取方法

#1 約100 mg植物材料在1.5 ml離心管中，用0.2 ml勻漿緩沖液（0.1 M EDTA、0.12 M Tris-HCl，pH 6.8、4% SDS、10%甘油、10% 2-L基乙醇）與柱塞和少量沙子混合。再加入0.8 ml緩沖液，充分混合。通過(guò)14,000 rpm離心去除雜質(zhì)。上清液與2x SDS上樣緩沖液混合后在95°C下煮沸10分鐘。（未檢測(cè)到BAK1條帶）

#2 約200 mg植物材料在研缽中用液氮研磨，收集至2.0 mL微量離心管中。加入0.2 ml 2x SDS上樣緩沖液（0.125 M Tris-HCl，pH 6.8、10% 2-L基乙醇、4% SDS、10%蔗糖、0.004% BPB），渦旋混合2分鐘，95°C煮沸10分鐘。通過(guò)14,000 rpm離心去除雜質(zhì)后收集上清液。（可視化BAK1條帶）

西方印跡操作

30 µL樣品在10% SDS-PAGE上分離，并使用Bio-Rad Trans-Blot Turbo Transfer System將蛋白轉(zhuǎn)印至Trans-Blot Turbo Mini PVDF Transfer Packs，轉(zhuǎn)印時(shí)間為7分鐘。膜在室溫下用4%脫脂奶粉（TBS-T）封閉1小時(shí)，期間不斷攪拌。膜在室溫下用一抗（稀釋度1:2000，4%脫脂奶粉，TBS-T）孵育1小時(shí)，期間不斷攪拌。棄去抗體溶液后，膜用TBS-T洗滌3次，每次5分鐘，期間不斷攪拌。膜在室溫下用山羊抗兔IgG（H&L），辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)（AS09 602，Agrisera）孵育1小時(shí)，稀釋度為1:2000，期間不斷攪拌。膜用TBS-T洗滌3次，每次15分鐘，期間不斷攪拌，并用Agrisera ECL SuperBright顯色5分鐘。曝光時(shí)間為1分鐘。

其他信息：

抗體可結(jié)合AtBAK1-Myc，但不與AtSOBIR發(fā)生交叉反應(yīng)。

附加信息：

如果需要，該產(chǎn)品可以含有Proclin。

關(guān)于CE提取緩沖液的額外信息：CE緩沖液不需要每次都新鮮配制。分裝后可保存在-20°C。Na?MoO?和NaF是磷酸酶抑制劑，用于防止提取過(guò)程中目標(biāo)蛋白的磷酸化形式丟失。EDTA螯合金屬離子，從而抑制許多需要金屬離子作為輔因子的酶，并抑制蛋白酶的活性。蛋白酶抑制劑混合物是Sigma編號(hào)P9599，稀釋比例為1:100。

抗體可在總提取物中識(shí)別AtBAK1-Myc。

BAK1|β-膽固醇不敏感受體激酶1文獻(xiàn)參考：

Lee et al. (2024). Reprogramming of flagellin receptor responses with surrogate ligands. Nat Commun. 2024 Nov 12;15(1):9811.doi: 10.1038/s41467-024-54271-5.  

Jing et al. (2024). Copine proteins are required for brassinosteroid signaling in maize and Arabidopsis. Nat Commun. 2024 Mar 8;15(1):2028.doi: 10.1038/s41467-024-46289-6.  

Xu et al. (2022) The Phloem Intercalated With Xylem-Correlated 3 Receptor-Like Kinase Constitutively Interacts With Brassinosteroid Insensitive 1-Associated Receptor Kinase 1 and Is Involved in Vascular Development in Arabidopsis. Front Plant Sci. 2022 Jan 11;12:706633. doi: 10.3389/fpls.2021.706633. PMID: 35087541; PMCID: PMC8786740.