非接觸式超聲波DNA打斷儀通過超聲波空化效應(yīng)與機(jī)械剪切力的協(xié)同作用,實(shí)現(xiàn)DNA分子的快速打斷,其核心打斷方法及優(yōu)勢(shì)如下:
一、打斷方法:
空化效應(yīng)的產(chǎn)生
儀器通過壓電轉(zhuǎn)換器將電信號(hào)轉(zhuǎn)換為高頻聲波(通常為20-100 kHz),在液體介質(zhì)(如DNA溶液)中傳播時(shí),聲波壓力交替變化形成高壓區(qū)和低壓區(qū)。
低壓區(qū)產(chǎn)生微小氣泡(空化泡),這些氣泡在超聲波的負(fù)壓相作用下迅速生長(zhǎng),并在高壓相作用下瞬間破裂,釋放出沖擊波和微射流。
機(jī)械剪切力的作用
沖擊波和微射流具有很高的能量和速度(可達(dá)100 m/s),能夠穿透DNA分子鏈,通過剪切力直接斷裂DNA雙鏈或單鏈。
空化泡破裂時(shí)產(chǎn)生的局部高溫(約5000 K)和高壓(約1000 atm)進(jìn)一步增強(qiáng)剪切效果,但這一過程在液體中瞬時(shí)完成,對(duì)DNA的損傷較小。
非接觸式操作
超聲波通過離心管或反應(yīng)容器壁直接穿透至樣品,無需探頭與樣品直接接觸,避免了傳統(tǒng)接觸式打斷儀可能引入的樣品污染和交叉污染。
樣品置于獨(dú)立的全封閉試管中,實(shí)驗(yàn)安全性更高,尤其適用于無菌或高價(jià)值樣品(如臨床樣本、稀有基因組DNA)。
二、技術(shù)優(yōu)勢(shì):
片段大小可控
通過調(diào)節(jié)超聲波參數(shù)(功率、頻率、作用時(shí)間、脈沖間隔),可準(zhǔn)確控制DNA片段的平均長(zhǎng)度(如100-500 bp),滿足二代測(cè)序(NGS)、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等實(shí)驗(yàn)需求。
例如:設(shè)置超聲功率為100W、工作時(shí)間20s、間隔10s、總時(shí)長(zhǎng)4分鐘,可將全基因組DNA打斷為平均266bp的片段,99-503bp區(qū)間占比達(dá)89.33%。
高通量處理能力
儀器通常配備多通道適配器(如8通道、16通道或32通道),可同時(shí)處理多個(gè)樣品,單次實(shí)驗(yàn)通量顯著高于傳統(tǒng)接觸式打斷儀。
萊恩德DNA打斷儀20-400Khz混頻超聲功能,頻率自適應(yīng),能適應(yīng)多種樣本處理需求,提高破碎效率。
打斷效果均一
超聲波在液體中具有廣泛的分布性和穿透性,結(jié)合旋轉(zhuǎn)離心管或三維聚焦技術(shù),可確保樣品各區(qū)域受到均勻的剪切力,避免局部過度打斷或未打斷。
毛細(xì)管電泳檢測(cè)結(jié)果顯示,非接觸式打斷的DNA片段分布集中,目標(biāo)長(zhǎng)度片段得率高。
低溫保護(hù)與生物安全
儀器可配備低溫恒溫槽(如4℃),防止超聲過程中樣品過熱,保護(hù)DNA完整性。
全封閉操作避免氣溶膠傳播,降低生物危害風(fēng)險(xiǎn),符合實(shí)驗(yàn)室生物安全要求。
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